[发明专利]一种利用24孔板筛选润滑油降解菌的方法

摘要

本发明一种利用24孔板筛选润滑油降解菌的方法涉及一种功能型微生物的筛选方法，属于环境污染物生物降解领域。针对润滑油降解微生物的筛选，可以利用24孔板评价在菌种分离时获取的单菌落降解润滑油的能力，特别适用于大规模的菌种筛选。该方法利用在油水两相体系中，油膜的变化和细胞光密度的变化两个指标同时表征菌种对润滑油的降解能力，可以从大量的初筛菌株中优选出降解能力优良的菌种，为进一步开展菌种降解能力研究提供优化的菌种资源。该发明适用于油水两相实验体系，有效地减少了传统的以繁琐的摇瓶降解实验和含油量检测为评价依据的表征方法，大幅度地减少了工作量和实验耗材、缩短了实验周期。

主权项

利用24孔板开发出一种表征微生物降解润滑油能力的方法，来自斜面的菌种经2次LB培养基活化后，控制第二次活化的细胞培养液OD₆₀₀=1.2±0.02，取1mL次级培养液在6000rpm下离心10min，弃上清液后用1mLpH=7.2的磷酸缓冲溶液重悬、洗涤细胞，重复离心、洗涤操作一次后，利用200μL的上述磷酸缓冲液制备成静止细胞，将新制备的静止细胞作为接种体接种到含2.5mL无机盐选择培养基的24孔板的微孔内，再向微孔内添加300μL润滑油，制备成菌种生物降解体系，每株菌做3个平行的微孔实验，将24孔板置于恒温培养箱中于37℃恒温培养6‑8天，每天观察微孔表面油膜变化，以黄色或近黑色油膜中心出现乳白色视为润滑油开始被降解，且中心乳白色区域由内向外逐渐扩展润滑油颜色消退作为优良菌株的判断依据，同时，用微量移液器吸取2mL细胞发酵液利用分光光度计在600nm波长下测其光密度，根据油膜消退和光密度值评价微生物降解润滑油的能力。