[发明专利]一种生物柴油油脂的生产方法

摘要

一种生物柴油油脂的生产方法，按如下步骤：（1）将微生物提油后剩余物质用细胞溶解酶酶解，得到微生物提油后剩余物质酶解液（2）将水与上述酶解液按5~3:1的质量比，并加入硫酸镁、氯化铁和磷酸二氢钠，配制异养微生物发酵培养基；（3）将产油异养微生物接种于步骤（2）的发酵培养基中三阶段发酵；将产油自养微生物经无菌操作接种于灭菌f/2培养基中三阶段培养；（4）收集步骤（3）中产油微生物生物质，先预处理，再按正己烷、乙醇和预处理后的微生物生物质体积比1：1：1~3，提取油脂，有机相经30~50℃，20~80转/分钟旋转蒸发，去溶剂，去杂，干燥，得到微生物油脂。本发明提高了产油效率，降低了生产成本，环境友好，节约用地，保护环境。

主权项

一种生物柴油油脂的生产方法，其特征是按如下步骤：（1）将微生物提油后剩余物质与细胞溶解酶以10~100∶1的质量比混匀，置于反应器中，磁力搅拌下反应，温度30~50℃，初始pH 5.0~7.0，搅拌转速50~300转/分钟，时间3~6小时，反应结束后105℃处理10~30分钟，得到微生物提油后剩余物质酶解液；（2）将水与微生物提油后剩余物质酶解液按5~3:1的质量比，并加入25~100mg/L的硫酸镁，50~150mg/L的氯化铁和0~75mg/L的磷酸二氢钠，经115~121℃,15~30分钟灭菌，作为异养微生物发酵培养基，用于发酵；（3）将产油异养微生物接种于步骤（2）的异养微生物发酵培养基中，置于发酵罐中生长，发酵过程中温度30~40℃、采用基于pH调控策略的三阶段培养法：第一阶段pH为5.0~6.0，第二阶段pH为6.0~7.0，第三阶段pH为7.0~8.0，三阶段时间相同、通气量0.1~1.0vvm、总发酵时间48~120小时；将产油自养微生物经无菌操作接种于灭菌f/2培养基，置于密闭光生物反应器中培养，培养温度25℃~30℃、采用基于pH调控策略的三阶段培养法：第一阶段pH为6.0~7.0，第二阶段pH为7.0~8.0，第三阶段pH为8.0~9.0，三阶段时间相同、自然光或人工光光照强度500~5000lx、光暗周期12/12、总培养时间7~15天；发酵罐的进出气口与光生物反应器的进出气口相连；（4）收集步骤（3）中的自养和异养产油微生物生物质，用水冲洗；经细胞溶解酶预处理：产油微生物生物质与细胞溶解酶以10~100∶1的质量比混匀，30~50℃，初始pH 5.0~7.0，搅拌转速50~300转/分钟，3~6小时；按正己烷、乙醇和预处理后的微生物生物质体积比为1：1：1~3，用正己烷和乙醇提取油脂，有机相经温度30~50℃，转速20~80转/分钟旋转蒸发，去除有机溶剂后，去杂，干燥，即得到微生物油脂。