[发明专利]一种分离纯化背根神经元的方法

摘要

本发明公开了一种分离纯化背根神经元的方法该方法包括以下步骤：步骤一、细胞混合液的制备；步骤二、细胞悬浮液的制备；步骤三、对细胞悬浮液进行纯化，得到背根神经节神经元。采用该方法节省了纯化步骤和时间，同时解决了纯化时间过长导致细胞被细菌污染的几率大的问题。

主权项

一种分离纯化背根神经元的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一、细胞混合液的制备：切取大鼠胚胎的背根神经节放入培养基中进行培养；将得到的背根神经节放入培养皿中，然后加入质量浓度为0.03%～0.15%的胰酶/EDTA溶液进行消化，消化时间为10min～30min，消化后得到细胞混合液；步骤二、细胞悬浮液的制备：收集步骤一中所得的细胞混合液中的细胞，向其中加入含胎牛血清和DNA酶的培养基，然后将其吹散，并将吹散后的细胞用细胞过滤器进行过滤，采用神经元基础培养液洗涤过滤后的细胞，得到细胞悬浮液；步骤三、对细胞悬浮液进行纯化，得到背根神经节神经元：将多熔素和层粘连蛋白包被的盖玻片放入细胞培养板中，再向每孔中加入步骤二中得到的细胞悬浮液，第一次细胞培养18h～26h后，然后加入N‑乙基顺丁烯二酰亚胺，得到N‑乙基顺丁烯二酰亚胺的质量浓度为45μg/ml～95μg/ml的混合液，第二次细胞培养68h～75h，用培养基第一次置换1/2～2/3的混合液，然后每间隔46h～50h用培养基进行第二次和第三次置换1/2～2/3的混合液，共换液三次后得背根神经节神经元。