[发明专利]香石竹PS1基因5`侧翼未知序列的克隆方法

摘要

本发明公开了一种香石竹PS1基因5'侧翼未知序列的克隆方法，属于生物工程技术领域。该方法根据同源序列设计5条简并引物及2条特异引物，采用巢式PCR扩增，均能获得香石竹PS1基因5'侧翼未知序列。本发明方法具有操作简便、操作限制少、克隆的片断长、针对性强和成本低廉等特点。

主权项

香石竹PS1基因5'侧翼未知序列的克隆方法，其特征在于：（一）提取香石竹基因组总DNA，采用巢式PCR扩增，以提取的香石竹基因组总DNA为模板，分别用A1和B2为引物、A2和B2为引物、A3和B2为引物或A4和B2为引物进行第一轮PCR扩增；（二）再以首轮A1和B2为引物的PCR扩增产物为模板，以A2和B1为引物进行第二轮PCR扩增；或以用A2和B2为引物的PCR扩增产物为模板，用A3和B1为引物进行第二轮PCR扩增；或以用A3和B2为引物的PCR扩增产物为模板，用A4和B1为引物进行第二轮PCR扩增；或以用A4和B2为引物的PCR扩增产物为模板，用A5和B1为引物进行第二轮PCR扩增；将第二轮PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，PCR产物回收纯化后测序，验证是否是目的片断；所述A1引物的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述A2引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，所述A3引物的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，所述A4引物的碱基序列如SEQ ID NO：4所示，所述A5引物的碱基序列如SEQ ID NO：5所示，所述B1引物的碱基序列如SEQ ID NO：6所示，所述B2引物的碱基序列如SEQ ID NO：7所示。