[发明专利]一种抗鸭病毒性肝炎山豆根多糖及其分子修饰物

摘要

本发明涉及一种抗鸭病毒性肝炎山豆根多糖及其分子修饰物，属于中兽药制备技术领域。提取了山豆根多糖不同醇沉部分，经反复临床试验筛选出抗鸭病毒性肝炎(DVH)活性部位，再用正交法确定氯磺酸-吡啶硫酸化修饰山豆根多糖活性部位的最佳条件为：反应温度95℃，反应时间2h，氯磺酸-吡啶配比1∶5，经红外光谱分析所得产物为山豆根多糖硫酸酯，其总糖含量达83.77％，硫酸根含量达39.33％，产物得率达117.33％。山豆根多糖硫酸酯抗DHV-1感染鸭胚肝细胞作用和对DVH的疗效显著强于山豆根多糖。本发明所获得的抗DVH山豆根多糖活性部位硫酸酯具有较高的糖和磷酸根含量，及较高产物得率，对DVH有良好疗效。

主权项

一种抗鸭病毒性肝炎山豆根多糖硫酸化分子修饰方法，采用氯磺酸‑吡啶法硫酸化分子修饰山豆根多糖。 (1)采用水煎醇沉法，收集不同醇沉部位山豆根多糖，以其添加于饮水中治疗鸭肝炎病毒DHV‑1攻毒鸭，数次临床试验发现山豆根多糖酒精浓度65％醇沉部分(BSRPS65)对鸭病毒性肝炎有较理想的治疗效果。 (2)将带有搅拌装置的三颈烧瓶置于冰中，加入无水吡啶20mL，剧烈搅拌，使之充分冷却，按氯磺酸‑吡啶的配比将氯磺酸逐滴缓慢加入，冷却后于65～95℃水浴锅上融化成淡黄色液体。称取抗鸭病毒性肝炎山豆根多糖活性部位(BSRPS₆₅)300mg，加入酯化试剂，在一定温度下反应适当时间。反应结束后立即加入100mL冰水，用饱和氢氧化钠溶液(20.0mo1.L^‑1)调pH至7后放入透析袋中，用自来水流水透析2d、蒸馏水流水透析1d，将透析袋中的硫酸化多糖浓缩并冷冻干燥后得硫酸化山豆根多糖。 (3)上述方法硫酸化分子修饰山豆根多糖的条件为：反应温度65℃～95℃、反应时间1～3h、氯磺酸‑吡啶的配比为1∶5～9。 (4)按照上述方法硫酸化分子修饰山豆根多糖的最佳条件为：反应温度95℃、反应时间2h、氯磺酸‑吡啶的配比为1∶5。 (5)在最佳条件下硫酸化分子修饰山豆根多糖，其产物中山豆根多糖硫酸酯总糖含量为83.77％，硫酸根含量为39.33％，产物得率为117.33％。 (6)在最佳条件下硫酸化分子修饰山豆根多糖，其产物的红外光谱图基本形状与修饰前一致，未发生根本性改变，均具有多糖特征吸收峰，除多糖母体特征峰得到保留之外，在1248cm^‑1处出现的吸收峰是由不对称S=O伸缩振动引起的，在814cm^‑1处左右出现了C‑O‑SO₃相关的对称性C‑O‑S吸收峰，表明本法中硫酸化分子修饰山豆根多糖产物为山豆根多糖硫酸酯。 (7)在最佳条件下制备的山豆根多糖硫酸酯对鸭肝炎病毒DHV‑1感染体外培养的鸭胚肝细胞具有良好的抑制作用，且优于未修饰的山豆根多糖。 (8)在最佳条件下制备的山豆根多糖硫酸酯对鸭肝炎病毒DHV‑1攻毒感染引起的鸭病毒性肝炎具有良好的治疗作用，其作用优于未修饰的山豆根多糖。 (9)在山豆根多糖(BSRPS₆₅)及其硫酸酯治疗鸭病毒性肝炎的治疗剂量分别为4mg/羽和2mg／羽，添加于饮水中，连用3天。