[发明专利]一种汉逊酵母HCP抗体制备方法，制得抗体及其应用

摘要

本发明公开了一种抗汉逊酵母宿主蛋白(HCP)抗体，所述抗汉逊酵母宿主蛋白抗体为多克隆抗体，以汉逊酵母菌株制得汉逊酵母宿主蛋白后经动物免疫再经抗体纯化后制得。本发明还提供了该抗体的制备方法，该方法包括制备汉逊酵母宿主细胞全蛋白，通过在常规免疫动物的方法中加入抗原纯化步骤，使得动物在对汉逊酵母全部宿主细胞产生免疫反应后，加强对于部分较弱免疫原性宿主蛋白的免疫反应性，从而制得低免加强型宿主残余蛋白抗体；实验结果表明，本发明提供的抗体可应用于ELISA检测宿主残余蛋白中，不仅能提高灵敏度，而且对于大部分由汉逊酵母表达的生物制品的宿主残余蛋白检测都通用，因此具有十分广阔的应用前景。

主权项

一种制备汉逊酵母HCP低免加强型抗体的方法，其特征在于，通过在常规免疫动物的方法中加入抗原纯化步骤，使得动物在对汉逊酵母全部宿主细胞产生免疫反应后，加强对于部分较弱免疫原性宿主蛋白的免疫反应性，从而制得低免加强型HCP抗体，所述方法包括以下步骤：a)选取几种常用汉逊酵母菌种分别进行种子培养和诱导表达，收集菌体；b)将上述分别诱导表达的菌体，各取相等的重量，进行混合，细胞破碎，固液分离，收集破菌上清，过滤除菌，制得汉逊酵母HCP全蛋白；c)使用汉逊酵母HCP全蛋白加上合适的佐剂免疫动物，数次免疫后，获得中间抗体；d)使用中间抗体制备亲和层析胶，亲和纯化汉逊酵母HCP全蛋白，获得汉逊酵母HCP低免蛋白；e)使用汉逊酵母HCP低免蛋白在步骤c)的基础上继续免疫动物，数次免疫后，获得汉逊酵母HCP低免加强型抗体，其中，步骤a)所述的常用汉逊酵母菌种均为野生型，步骤c)中所述的数次免疫为三次免疫，所述的三次免疫分别为在第0，14，28天进行，步骤e)中所述的数次免疫为三次免疫，所述的三次免疫分别为在第42，49，56天进行，所述的常用汉逊酵母菌种为ATCC14754、ATCC34438或ATCC66057。