[发明专利]树脂脱色用于比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性的方法

摘要

发明公开了树脂脱色用于比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性的方法。该法有效地降低了中药提取液色素对比色分析测定α-淀粉酶活性的干扰，为体外筛选α-淀粉酶抑制剂提供了简单实用、环境友好、分析重复性好的方法。该方法是将植物或药材粉碎，水提或醇提，合并滤液，取一定量滤液离心，离心后取上清液，上清液作为上样液通过D101大孔树脂柱，用不同浓度的乙醇-水溶液梯度洗脱，分别收集不同梯度的流份，既得颜色深浅程度不同及对a-淀粉酶抑制活性不同的流份。本发明运用D101大孔树脂对药材提取液的脱色，降低了在a-淀粉酶抑制活性测定中抑制剂的颜色对比色分析带来的干扰。

主权项

树脂脱色用于比色法测定α‑淀粉酶抑制剂活性的方法，其特征在于，按以下步骤操作：1）将提取液颜色较深的植物或药材红茶、巴戟天、黄芪或红景天粉碎后用蒸馏水提取：称取红茶、巴戟天、黄芪或红景天粉末10.00g，加入100mL蒸馏水于90℃水浴中提取30min，过滤，药渣加80mL蒸馏水于90℃水浴提取30min，过滤，药渣加60mL蒸馏水于90℃水浴提取30min，过滤，将三次滤液合并，定容至250mL浓度为每1ml相当于0.04g生药，取30mL滤液离心，离心条件为4000r/min、10min，取上清液20mL作为上样液；2)准确称取经常规处理、去除表面水分的D101大孔树脂8.00g，将其装入2cm*15cm层析柱中，柱体积为13mL，取步骤1）的上样液通过层析柱，控制流速为3BV/h，把流出液再重复一次通过层析柱，流出液分别用10%、30%、50%、70%、95%乙醇‑水溶液梯度洗脱，流速为2BV/h，每个梯度洗脱剂用量40mL约为3BV，收集各梯度洗脱流份；3)各梯度洗脱流份，用3,5‑二硝基水杨酸比色法测定脱色后流份对α‑淀粉酶的抑制作用；植物或药材红茶、巴戟天、黄芪或红景天提取液的色素集中于30%～50%的乙醇梯度流份中，70%～95%流份色素较少，收集70%～95%流份用3,5‑二硝基水杨酸比色法测定该流份对α‑淀粉酶的抑制活性；各梯度的洗脱流份在722分光光度计中平行测定A520值6次，取平均值，以A520值的大小来定量比较脱色的效果。