[发明专利]一种快速高通量的肠源致病菌检测方法

摘要

本发明涉及一种快速、灵敏、高通量的肠源致病菌检测方法。本发明的检测方法整合了聚合酶链式反应PCR和微阵列这两种强大的分子生物学技术，把PCR杂交的探针直接固定在微阵列中的杂交舱中，与PCR反应室在同一张芯片上；检测方法包括：标本进行增菌处理，DNA液提取，PCR扩增，杂交，清洗，结果判读。本发明能对副溶血弧菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、沙门氏菌基因进行快速高通量的检测，通过本发明可大幅度提高进出口口岸一线检验检疫人员的检测效率，既可减少工作量、又可最大限度地解决传统检测方法可能存在的阳性漏检问题，从而最大限度地防止主要食品安全事故的发生。

主权项

一种快速高通量的肠源致病菌检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）标本进行增菌处理；（2）DNA液提取；（3）PCR扩增：a.PCR反应体系包括：PCR反应缓冲液,待测菌基因特异性正、反向引物，PCRGrade H₂O,PCRControl,DNA提取液；b.将PCR反应液加入已含有待测菌基因特异性探针的芯片内，将芯片放入反应室内进行扩增反应；（4）杂交：PCR扩增完后，将杂交反应液加入芯片，使杂交液和扩增液都进入到杂交舱内杂交反应；（5）清洗：杂交后的芯片用洗液冲洗，直接用荧光扫描仪检测；（6）结果判读。；所述的待测菌基因为志贺氏菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单核增生李斯特菌各自特有基因。