[发明专利]白块菌菌根合成方法

摘要

白块菌菌根合成方法，具体涉及国产白块菌（攀枝花白块菌T.panzhihuanense sensu lato）与华山松菌根合成方法。包括华山松种子和白块菌菌种及其子实体的筛选、无菌树苗的培育、菌剂制备、育苗基质配伍及其pH值的调节及其优选，菌剂浓度、接种要求，菌根苗的培养与菌根形态解剖与基因水平DNA分子检测和确认，移栽种植等步骤，为实现国产白块菌（攀枝花白块菌T.panzhihuanense sensu lato）的人工种植提供了必备的关键核心技术，本方法可应用于荒山荒坡土壤修复与改良、退耕还林植树造林及植被的修复与重建，对于开发利用石灰岩山地粘质土壤区域及偏僻山地林区具有巨大潜力，最终实现人工菌根合成及其种植白块菌，实现稀有物种的保护和持续利用。本发明的方法操作简易，容易广泛应用与推广。

主权项

白块菌菌根合成方法，包括下述步骤：(1)华山松播种和育苗，A、种子：筛选华山松饱满种子，在4‑8℃冰箱内保藏2‑12个月；育苗时取出在30％H2O2浸泡2小时后，用无菌水冲洗5‑6次，弃去漂浮的种子，用无菌水浸泡48小时，捞出，用破壳器机械方式使种子轻微破口，再用75％酒精棉纱擦拭消毒，置于培养皿中备用；B、基质：取未过筛蛭石与珍珠岩按体积比1:1混匀，加入水使其含水量达30％，在高温（121～126℃）高压（102.97～137KPa）下蒸汽灭菌至少1小时；C、播种：将(1)A步骤中备好的种子，以开口端向下的方向播入基质中，播种深度为1.5‑2cm，覆盖（1）B步骤中制备的基质，并抚平踏实；D、育苗：将上述播种好的育苗筐在育苗室育苗，室内温度控制在16‑25℃，确保通风透光，适时浇水育苗；(2)白块菌菌剂制备和接种A、菌剂制备：选1‑2月份产的成熟白块菌，显微镜下观察孢子形态，孢子纹饰清晰，黑褐色孢子与未成熟黄褐色孢子的比例达95∶5为成熟子囊果，成熟子囊果用自来水清洗干净后，无菌水冲洗3遍，4‑8℃冷藏10‑20天后，再在‑24℃冷冻保存不超过18个月备用；菌剂制备前将冷冻子囊果取出，自然解冻，逐一镜检确认物种准确，将每一子囊果切为数块颗粒状，置于搅拌粉碎机中，加无菌水粉碎，显微镜下镜检，确定95％的子囊游离，5％的子囊孢子从子囊分离出为止，菌剂的浓度为每克子囊果/3‑5ml水；B、接种基质制备：腐熟的腐殖质土过筛，适量拌入水，使水分含量30％，高温（121～126℃）高压（102.97～137KPa）灭菌3小时备用；腐殖质、蛭石、砂、珍珠岩以体积比1:1:0.5:0.25的比例混合后，加入适量石灰粉使pH值调整为7.6—8.3，备用；C、接种，按每株接种1.2×107个孢子的量折算出每株需接种的菌剂的体积，取菌剂浇入步骤（2）B制备的基质中，拌匀；同时，将步骤(1)培育所获得的幼苗自育苗基质中取出，剪去根的1/3末端以造成创伤，促进生根，将幼苗根系全部浸入步骤(2)A制备的菌剂后取出，植入步骤(2)B的已接种的基质中；(3)、菌根苗培育，已接种的幼苗置于自然通风、光照充足的育苗大棚内，自来洁净水浇灌，干、温交替培养，培养温度10‑26℃，太阳光照10‑14小时。