[发明专利]一种细胞膜蛋白质富集纯化方法有效
| 申请号： | 201310557138.7 | 申请日： | 2013-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN104628810B | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;方菲;赵群;随志刚;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种细胞膜蛋白质富集纯化方法，该方法利用细胞膜表面整合膜蛋白质贯穿于膜双分子层且细胞膜表面膜蛋白质多发生糖基化修饰的自然特征，通过功能化磁性微球捕获作为诱饵的细胞膜表面糖基化修饰蛋白质，实现细胞膜与细胞器的分离及细胞膜整合膜蛋白质的高效富集。该方法具有细胞膜与细胞器分离效率高的优点，可对细胞膜蛋白质进行高效分析及表征。此外功能化磁性微球的引入，使该方法具有操作简便，分离快速且样品损失低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 细胞膜 蛋白质 富集 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种细胞膜蛋白质富集纯化方法，其特征在于：使用功能化磁性微球捕获作为诱饵的细胞膜表面糖基化修饰蛋白，以富集及分析细胞膜蛋白质，具体包括：（1）将培养皿中孵育的细胞样品消化后，向细胞样品中加入由氧化缓冲液配制的氧化剂溶液与细胞进行反应；（2）氧化反应结束后，采用氧化缓冲液清洗步骤（1）中细胞样品；（3）向细胞样品中加入悬浮于氧化缓冲液的带有功能化官能团的磁性微球，室温下震荡2‑24h；（4）采用三羟甲基氨基甲烷缓冲液清洗步骤（3）中捕获细胞样品的磁性微球；（5）将步骤（4）中捕获细胞样品的磁性微球重悬浮于三羟甲基氨基甲烷缓冲液，室温下孵育5min‑2h；（6）使用盐溶液清洗步骤（5）中细胞样品；（7）对步骤（6）中经清洗的细胞样品进行裂解；（8）使用盐溶液清洗步骤（7）中经裂解的细胞样品；（9）使用酶解或溶剂萃取的方法获得磁性微球上富集的细胞膜蛋白质，得所需细胞膜蛋白样品溶液。
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