[发明专利]一种免疫活性肽冻干粉及其制备方法

摘要

本发明的一种免疫活性肽冻干粉及其制备方法，属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种免疫活性肽冻干粉及其制备方法。实现了以水分含量为1.0%～5.0%、蛋白质含量为40%～70%的玉米蛋白粉、小麦蛋白粉、大米蛋白粉、大豆蛋白粉、绿豆蛋白粉和禽蛋蛋清粉中的任意一种为原料，设计原料超微粉碎、蛋白溶液调配和均质化、高压脉冲电场环境下可控酶解、低温灭酶、低温离心、低温膜分离、真空冷冻干燥的工艺路线，获得水分含量为1.2%～1.8%、蛋白质含量为72%～86%、分子量为10～30kDa的免疫活性肽冻干粉。经免疫活性评价实验证明，与对照组相比，受试组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力显著提高。

主权项

一种免疫活性肽冻干粉的制备方法，其特征在于，是以水分含量为1.0%～5.0%、蛋白质含量在40%～70%的玉米蛋白粉、小麦蛋白粉、大米蛋白粉、大豆蛋白粉、绿豆蛋白粉和禽蛋蛋清粉中的任意一种为原料，经过原料超微粉碎、蛋白溶液调配和均质化、高压脉冲电场环境下可控酶解、低温灭酶、低温离心、低温膜分离、真空冷冻干燥过程，制备出水分含量为1.2%～1.8%、蛋白质含量为72%～86%、分子量为10～30kDa的免疫活性肽冻干粉；1）所述的原料超微粉碎过程，是将原料进行超微粉碎至颗粒细度为300～400目，获得蛋白超微粉密封备用；2）所述的蛋白溶液调配和均质化，是选择纯净水、去离子水、渗透水和蒸馏水中的任意一种，将蛋白超微粉调至底物蛋白浓度为1%～10%（W/W）的蛋白溶液；利用高速分散均质机对蛋白溶液进行均质化处理，调控转速为1000～4000r/min，处理时间为5～30min，获得均质化蛋白溶液；3）所述的高压脉冲电场环境下可控酶解，是在环境温度为15～25℃的条件下，将长度为1～3mm、半径为0.5～1mm的双电极安装于高压脉冲电场装置上，依次选用75%的乙醇、水分别清洗装置内物料循环管路2～3次，设定装置电场强度为5～50kV/cm，电场频率为500～3000Hz的工作状态下，待机；再用1M NaOH溶液将均质化蛋白溶液调节pH值为6～11，按[E]/[S]为2%～12%（W/W）加入碱性蛋白酶，要求酶活范围为50万～150万u/g，用1M NaOH溶液控制均质化蛋白溶液的pH值变化在±0.05内；开启恒流泵，使高压脉冲电场装置管路中充满均质化蛋白溶液后，再调节恒流泵工作状态，使均质化蛋白溶液在高压脉冲电场装置内的恒定流速为1～10mL/min后，开启恒流泵和高压脉冲电场装置，循环处理2～5次，得到酶反应液；4）所述的低温灭酶，是将高压脉冲电场环境下可控酶解处理后的酶反应液迅速置于冰浴条件下的反应瓶中，控制酶反应液的温度为2～8℃，冰浴时间为5～35min，获得酶解液；5）所述的低温离心过程，是将酶解液进行低温离心，离心温度为4℃、转速为6000～12000×g、离心时间为5～30min，收集酶解上清液备用；6）所述的低温膜分离过程，是在环境温度为15～20℃的条件下，将酶解上清液进行低温膜分离处理，先用NaOH和蒸馏水分别对截流量为30kDa和10kDa的超滤膜进行清洗，控制NaOH浓度为0.01～0.15M、NaOH温度为10～30℃、NaOH清洗时间为1～2h，控制蒸馏水的温度为10～30℃、清洗时间为1～3h，控制NaOH和蒸馏水的膜面流速均为2.0～4.5mL/min，压力均为5～30pis；再依次选用截流量为30kDa和10kDa的超滤膜进行膜分离，控制酶解上清液的温度为2～10℃、膜面流速为2.0～4.5mL/min、压力为5～30pis，最后收集分子量为10～30kDa的酶解组分分离液备用；7）所述的真空冷冻干燥过程，是将低温膜分离后的酶解组分分离液转移到冷冻盘中进行预冻，控制液面厚度在5～10mm，预冻温度为‑30～‑15℃，预冻时间为2～6h，然后再置于真空冷冻干燥机冷冻仓内，控制真空度小于10Pa，真空冷冻干燥时间为9～15h，即可获得免疫活性肽冻干粉。