[发明专利]去氧孕烯中间体纳米脂质体生物转化的优化方法

摘要

本发明属于微生物技术领域，涉及纳米脂质体生物转化的优化方法，具体涉及纳米脂质体在微生物转化中应用的优化方法，特别是公开了采用纳米脂质体投料方式进行左旋乙基甾烯二酮的11α羟化制备去氧孕烯关键中间体的优化参数。采用本发明方法底物投料浓度为2g/L-7g/L时，可使左旋乙基甾烯二酮的11α羟化转化率高达60%-80%，显著高于游离底物投料方式下的投料浓度和转化率。

主权项

去氧孕烯中间体纳米脂质体生物转化的优化方法，包括以左旋乙基甾烯二酮为原料，以金龟子绿僵菌突变株（Metarhizium anisopliae）11490（CCTCC M2011240）为菌种进行微生物转化，其特征在于，该方法采用卵磷脂为载体将疏水性底物左旋乙基甾烯二酮制成底物纳米脂质体，再进行微生物转化，其包括步骤：1）底物纳米脂质体的制备采用薄膜分散法将左旋乙基甾烯二酮以卵磷脂为载体经高压均质机制成纳米脂质体，测定平均粒径；2）微生物与培养微生物菌种：Metarhizium anisopliae11490，菌种保藏号CCTCC M2011240；该菌种在左旋乙基甾烯二酮上引入11α羟基；斜面培养：将菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，其中添加质量百分比为0.25%的蚕蛹粉，26～30℃培养5～10天；发酵培养：将上述斜面菌种无菌接种于装有液体培养基摇瓶中，28℃条件下，旋转式摇床220r/min培养48小时，得种子液；3）生物转化将制得的底物纳米脂质体按底物浓度投入上述制备好的种子液中，相同条件下转化，取转化液分析；4）分析方法取发酵液加入L乙酸乙酯浸泡过夜，取样点样于GF254硅胶板，同时取底物和产物标准品点样对照，展开剂CH₂Cl₂:CH₃OH（20:1），CAMAG Scanner‑3扫描分析；所述的方法中将纳米脂质体应用于去氧孕烯关键中间体11α羟化的优化条件为：采用薄膜分散法结合高压均质机制备底物纳米脂质体并制成冻干粉储存，培养基pH为6.5，转化时间60‑70h，菌龄24h，投料浓度2g/L‑7g/L。