[发明专利]猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法。本发明的方法是：针对萨佩罗病毒的保守基因片段设计两条引物，准备RNA样品，设置反应条件，进行荧光定量RT-PCR。通过标准曲线的制作、特异性验证，结果显示该方法的最低检出限为10拷贝数的数量级；同时该方法具有高的特异性，可以与猪捷申病毒、猪肠道病毒9、猪口蹄疫病毒、脑心肌炎病毒、猪传染性肠胃炎、猪流行性腹泻和猪繁殖与呼吸道综合症病毒分离开来。对63份猪粪便样品进行检测，检测出7分样品，阳性率为11.11%。该方法具有简单、准确、高效、快速、无污染等特点，非常适合用于猪萨佩罗病毒的检测和定量。

主权项

一种猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT‑PCR检测方法，包括如下步骤：1)样品预处理样品采用1%的磷酸缓冲液处理后，采用RNA/DNA提取试剂盒提取RNA；2)配制反应体系采用SYBR荧光定量RT‑PCR试剂盒，配置反应液，其中，RT‑PCR的缓冲液为10微升，大连宝生的Taq HS混液为1.2微升，PrimeScript PLUS RTase混液为0.4微升，ROX参比染料II为0.4微升和无RNase dH2O为4.4微升，同时加入引物和待检样品RNA；3)反应和结果分析上述反应体系由ABI实时定量系统进行RT‑PCR；根据反应的曲线、Ct值和溶解曲线判断结果的阴性和阳性。