[发明专利]EML4-ALK融合基因荧光定量PCR检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种EML4‐ALK融合基因荧光定量PCR检测的试剂盒，适用于肺腺癌中EML4‐ALK融合基因突变的检测。本发明所述的试剂盒包括针对EML4‐ALK融合基因9种融合变体的保守序列特异设计的探针及引物以及阳性对照物。该试剂盒能快速、准确、高敏感度地检测9种最常见的EML4‐ALK融合基因变体，包括亚型1（E13；A20）、亚型2（E20；A20）、亚型3（E6a/b；A20）、亚型4（E14；A20）、亚型5（E2a/b；A20）、亚型6（E18；A20）、亚型7（E14；A20）7种变异亚型的9种融合变体，从而建立检测9种最常见EML4‐ALK融合基因变体的实时荧光定量PCR体系。

主权项

一种EML4‑ALK融合基因荧光定量PCR检测试剂盒，包括荧光定量反应液预混液、荧光定量反应液、阳性对照样品，其特征在于：所述荧光定量反应液包括：荧光定量反应液A、荧光定量反应液B、荧光定量反应液C、荧光定量反应液D、荧光定量反应液E、荧光定量反应液F、荧光定量反应液G、荧光定量反应液H、荧光定量反应液I；其中，所述荧光定量反应液A包括：检测EML4‑ALK亚型1（E13；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.1的正向引物、序列为SEQ ID NO.2的反向引物和序列为SEQ ID NO.3的探针；所述荧光定量反应液B包括：检测EML4‑ALK亚型2（E20；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.4的正向引物、序列为SEQ ID NO.5的反向引物和序列为SEQ ID NO.6的探针；所述荧光定量反应液C包括：检测EML4‑ALK亚型3a（E6a；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.7的正向引物、序列为SEQ ID NO.8的反向引物和序列为SEQ ID NO.9的探针；所述荧光定量反应液D包括：检测EML4‑ALK亚型3b（E6b；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.10的正向引物、序列为SEQ ID NO.11的反向引物和序列为SEQ ID NO.12的探针；所述荧光定量反应液E包括：检测EML4‑ALK亚型4（E14；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.13的正向引物、序列为SEQ ID NO.14的反向引物和序列为SEQ ID NO.15的探针；所述荧光定量反应液F包括：检测EML4‑ALK亚型5a（E2a；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.16的正向引物、序列为SEQ ID NO.17的反向引物和序列为SEQ ID NO.18的探针；所述荧光定量反应液G包括：检测EML4‑ALK亚型5b（E2b；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.19的正向引物、序列为SEQ ID NO.20的反向引物和序列为SEQ ID NO.21的探针；所述荧光定量反应液H包括：检测EML4‑ALK亚型6（E18；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.22的正向引物、序列为SEQ ID NO.23的反向引物和序列为SEQ ID NO.24的探针；所述荧光定量反应液I包括：检测EML4‑ALK亚型7（E14；A20）融合基因的序列为SEQ ID NO.25的正向引物、序列为SEQ ID NO.26的反向引物和序列为SEQ ID NO.27的探针；所述阳性对照样品包括：阳性对照样品A、阳性对照样品B、阳性对照样品C、阳性对照样品D、阳性对照样品E、阳性对照样品F、阳性对照样品G、阳性对照样品H、阳性对照样品I；其中，所述阳性对照样品A包含所检测EML4‑ALK亚型1（E13；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品B包含所检测EML4‑ALK亚型2（E20；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品C包含所检测EML4‑ALK亚型3a（E6a；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品D包含所检测EML4‑ALK亚型3b（E6b；A20）融合基 因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品E包含所检测EML4‑ALK亚型4（E14；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品F包含所检测EML4‑ALK亚型5a（E2a；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品G包含所检测EML4‑ALK亚型亚型5b（E2b；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品H包含所检测EML4‑ALK亚型6（E18；A20）融合基因基因组片断DNA质粒；所述阳性对照样品I包含所检测EML4‑ALK亚型7（E14；A20）融合基因基因组片断DNA质粒。