[发明专利]一种组织匀浆法分离活细胞构建细胞库的方法

摘要

本发明公开了一种组织匀浆法分离胎儿附属物组织细胞构建细胞库的方法，目的在于构建细胞库时步骤简单、省时、易于质控和规范化。本发明由下述步骤组成：(1)胎儿附属物组织的清洗；(2)组织的匀浆前处理；(3)组织匀浆处理分离细胞(团)；(4)匀浆后组织的过滤处理和细胞(团)的收集；(5)细胞(团)检测；(6)冻存分离的细胞(团)，构建细胞库。与现有方法相比，本发明方法具有操作简单、用时短、不引入外源试剂、易于标准化和质量控制以及细胞获得量大等优点，为提高胎儿附属物细胞库的构建效率，获得高质量用于治疗的干细胞具有重要的意义。

主权项

一种组织匀浆法分离胎儿附属物组织构建细胞(团)库的方法，其特征是由下述步骤组成：(1)对胎儿附属物组织提供者进行ABO／Rh血型检测、HLA分型检测、微生物免疫检测、用含双抗的缓冲液去除残留血液；(2)组织匀浆前处理：将清洗后的组织剪成小块，放入组织细胞处理装置样品室中，加入0.5‑2倍质量的缓冲液或培养基，密封组织细胞处理装置；(3)组织匀浆处理：运转组织细胞处理装置，在转速为1000‑3500rpm，处理时间为1‑15分钟的条件下，将组织切碎和匀浆，对组织进行细胞(团)的分离处理；(4)组织过滤处理：将步骤(3)得到的匀浆液通过100‑400目的滤网过滤：对于胎盘小叶和基蜕膜组织、胎盘底座组织，对滤网上残留的少许胎盘组织块进行研磨，收集滤液；对于脐带组织、胎盘羊膜组织，收集滤网上的细胞团。(5)细胞(团)收集与清洗：对于细胞，用离心管收集步骤(4)得到的细胞悬液，以1400‑1800rpm／分钟的速度离心5‑15分钟，去上清并加入缓冲液重悬细胞；对于细胞团，用缓冲液清洗后直接收集细胞团。(6)将步骤(5)分离的细胞(团)置液氮保存，按其ABO／Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出细胞库。