[发明专利]虹鳟鱼传染性胰腺坏死病毒RT-LAMP检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增（LAMP）技术快速检测虹鳟鱼传染性胰腺坏死病毒的试剂盒及其检测方法。本发明含有10×等温反应缓冲液、AMV 5U/μL、Rnasin 20U/μL、Bst DNA聚合酶8U/μL、10mM dNTP、25mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2、30μM环引物1、30μM环引物2和5M甜菜碱的反应液A和反应液B：1000×的荧光染料SYBR GreenI。通过对组织样品或细胞培养液中RNA提取、传染性胰腺坏死病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测等方法，从而实现对传染性胰腺坏死病毒的快速检测。本技术解决了现有检测技术检测时间长、操作复杂、需要昂贵仪器等缺点，适用于养殖场、兽医站等的快速现场检测。

主权项

一种虹鳟鱼传染性胰腺坏死病毒RT‑LAMP检测试剂盒，包括以下成分：（1）反应液A：含有10×等温反应缓冲液、AMV 5U/μL、Rnasin 20U/μL、Bst DNA聚合酶8U/μL、10mM dNTP、25mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2、30μM环引物1、30μM环引物2和5M甜菜碱，其中：    10×等温反应缓冲液含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐（pH 8.8）、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1%的曲拉通X‑100；内引物1：TCGGGGTCATACTTGCCATAGCTTTTCTGATCCCCAACCCAGAAC内引物2：ATGATCCTGTCCCACAGGGAGGTTTTCGCTCCTTGTACTCCTCAGT外引物1：GCTGGAGTGTCCAACTACG外引物2：GGAGAAGTCGGTGATCTCGT环引物1：GCTTGACTCTTGTGATCGGCTT环引物2：TTCTTCAGGAAACGGCAATGT   （2）反应液B：1000×的荧光染料SYBR GreenI。