[发明专利]一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法，通过石蒜样品的茉莉酸类化合物提取与纯化，标准品分离图谱的建立，茉莉酸类化合物含量的测定，较为快速准确地同时检测植物中多种茉莉酸类激素。检测结果可靠，各种化合物分离度较好。可以用于检测植物体中的茉莉酸类内源激素，为研究各种茉莉酸类激素在植物生长发育和次生代谢过程中所发挥的作用，同时为植物体中茉莉酸类化合物的代谢途径研究提供技术平台。

主权项

一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品的提取与纯化取待测样品的新鲜植物叶10g，加入20～30ml体积浓度为80%的甲醇溶液，加入吸附剂，冰浴研磨成匀浆，离心后取上清旋转蒸发至水相；加入磷酸盐缓冲液，脱色后萃取，然后复溶，经Spe C18小柱纯化后，使用0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液；（2）检测装置的设定色谱柱为Eclipse XDB‑C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相A甲醇，B pH3.6的乙酸水溶液；等度洗脱A：B=1:1，流速为1mL/min，检测波长235nm，柱温为25℃，待基线平稳，进样量为10μL；（3）标准曲线绘制分别准确称取茉莉酸JA、二氢茉莉酸DJA、茉莉酸甲酯MeJA和二氢茉莉酸甲酯DMeJA的标准品，加入甲醇溶解，摇匀配制成质量浓度为1.0～1.2mg/ml的标准品溶液；分别取各标准品溶液，加甲醇逐级稀释，制得质量浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml的标准系列溶液；分别精密量取10μl进样于高效液相色谱仪，记录色谱图，分别以各标准品的含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线，横坐标标准品的含量在5～200微克/毫升，得到标准品茉莉酸、二氢茉莉酸、茉莉酸甲酯和二氢茉莉酸甲酯的保留时间RT分别为：茉莉酸RT为4.380min，二氢茉莉酸的RT为6.256min，茉莉酸甲酯的RT为8.603min，二氢茉莉酸甲酯的RT为13.196min；（4）检测待测样品石蒜组织中的茉莉酸类含量将石蒜样品经步骤（1）提取与纯化后按照步骤（2）和步骤（3）进行HPLC检测，进样10μl，积分同一保留时间下的峰面积，一次性检测得到待测石蒜样品中四个茉莉酸类激素及其含量。