[发明专利]一种微波水解-HPLC法测定蚕蛹中氨基酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种微波消解-HPLC法测定蚕蛹中氨基酸含量的方法，利用微波消解仪对蚕蛹样品进行酸水解，采用高效液相色谱仪对蚕蛹水解样品进行氨基酸含量测定。包括步骤：（1）样品微波消解预处理；（2）色谱条件及标准曲线制备；（3）供试品溶液衍生化反应；（3）蚕蛹中氨基酸含量测定。根据氨基酸标准品溶液测得峰面积和浓度制定标准曲线，采用高效液相色谱仪对蚕蛹水解样品测定峰面积，由标准曲线计算出样品中氨基酸的含量。本发明具有微波消解预处理过程简单、样品消解快速完全、试剂用量少、操作安全、环境污染小等优点。

主权项

一种微波水解‑HPLC法测定蚕蛹中氨基酸含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）样品微波消解预处理：取待测蚕蛹样品粉末0.15～0.25g于微波消解罐中，加入3～4.0ml的5～6mol/L盐酸溶液，旋紧盖子，放上防爆裂膜，固定于保护套中，置微波消解仪内，消解采用程序升温，设置温度110～130℃，保持15～25分钟，待温度显示至室温时，打开微波消解仪，取出消解罐，转移样品至100ml容量瓶中，用0.1mol/L NaHCO3溶液稀释至满刻度，待用；（2）色谱条件及标准曲线制备：（a）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，梯度洗脱液由pH为6.0～6.8的25mM KH2PO4缓冲液和甲醇乙腈溶液组成，流速：1.0～1.5ml/min；检测波长：436nm；柱温：30～40℃；分析时间50～70min；（b）标准曲线制备：取氨基酸标准储备液，用0.1mol/LNaHCO3分别稀释成1、2、5、10、15、20nmol/ml的氨基酸标准液，各精密吸取200μl，置2mL离心管中，加DABS‑Cl乙腈液100～300μL，盖紧摇匀，放入50～70℃恒温水浴中，保温10～25min，取出离心管，加入适量衍生反应终止液，定容至1.0ml，振荡混匀，转速8000r/min离心10min，精密吸取10μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标制作标准曲线；（3）供试品溶液衍生化反应：取稀释后消解液20ml置蒸发皿中水浴蒸干，固体用0.1mol/LNaHCO3溶液溶解定溶于5ml容量瓶中，精密吸取200μl置2mL离心管中，加DABS‑Cl乙腈液100～300μL，盖紧摇匀，放入50～70℃恒温水浴中，保温10～25min，取出离心管，加入适量衍生反应终止液，定容至1.0ml， 振荡混匀，转速8000r/min离心10min，备用；（4）蚕蛹中氨基酸含量测定：精密吸取衍生化后供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，测定峰面积，根据标准曲线计算蚕蛹中氨基酸的含量。