[发明专利]利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法

摘要

本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定核心启动子的方法，包括以下步骤：步骤1：构建含7段不同长度MSTN基因5′调控区片段的pGL3-basic-MSTNpro重组体；步骤2：进行目标细胞的培养和铺板；配制步骤1所述pGL3-basic-MSTNpro与脂质体的混合物，用海肾荧光素酶载体pRL-TK为内参，进行细胞共转染；步骤3：用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测。

主权项

一种利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：根据牛MSTN基因5′调控区序列设计7组两端引物，以基因组DNA为模板，利用PCR反应进行扩增，获得7个不同长度MSTN基因5′调控区片段；对7个不同长度MSTN基因5′调控区片段进行酶切及纯化；再将7个不同长度MSTN基因5′调控区片段与所述的载体质粒的连接；然后筛选重组子；步骤2：进行目标细胞的培养和铺板；配制步骤1所述pGL3‑basic‑MSTNpro重组体与脂质体的混合物，以海肾荧光素酶载体pRL‑TK为内参，扎克进行细胞转染；步骤3：用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测；将步骤2所得的共转染后的细胞；经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取20μl细胞裂解液于酶标板中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。