[发明专利]一种测定杆状病毒滴度的方法无效
申请号: | 201310309787.5 | 申请日: | 2013-07-23 |
公开(公告)号: | CN103364560A | 公开(公告)日: | 2013-10-23 |
发明(设计)人: | 李晶梅;朱薇;温文生;漆世华;谢红玲;靖志强;李建;秦红刚;廖园园 | 申请(专利权)人: | 武汉中博生物股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/569 |
代理公司: | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人: | 张火春 |
地址: | 430070 湖北省*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明公开了一种测定杆状病毒滴度的方法,该方法包括如下步骤:将对数生长期的昆虫细胞以2×104~4×104/0.1mL/孔的细胞密度铺到细胞培养板中,置培养箱中培养使昆虫细胞贴于孔底;将被检的杆状病毒接种到昆虫细胞板中于培养箱中培养;弃去细胞板内培养基,固定,洗细胞板,加入gp64单抗孵育,洗细胞板,再加入羊抗鼠荧光抗体孵育,洗细胞板,荧光显微镜下观察;计算病毒的TCID50。本发明测定杆状病毒滴度的方法结合了间接免疫荧光,是一种直接判定各孔细胞是否感染的TCID50测定方法,重复性好,得到的检测结果更为准确,不需要结合细胞病变来进行判断,没有主观和经验因素的影响。 | ||
搜索关键词: | 一种 测定 杆状病毒 方法 | ||
【主权项】:
一种测定杆状病毒滴度的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)昆虫细胞板的制备:将对数生长期的昆虫细胞以2×104~4×104/0.1mL/孔的细胞密度铺到细胞培养板中,置培养箱中培养使昆虫细胞贴于孔底;(2)接种杆状病毒:将被检的杆状病毒接种到昆虫细胞板中于培养箱中培养;(3)间接免疫荧光确定被感染的细胞孔数:弃去细胞板内培养基,固定,洗细胞板,加入gp64单抗孵育,洗细胞板,再加入羊抗鼠荧光抗体孵育,洗细胞板,荧光显微镜下观察,细胞膜显示亮绿色荧光判定该细胞所在孔为阳性孔;(4)病毒滴度计算:计算病毒的TCID50。
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