[发明专利]一种基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，在未加入组氨酸，只有抗坏血酸钠还原二价铜为一价铜作为催化剂的条件下，修饰有叠氮基与修饰有炔基的DNA发生1,3-偶极环加成反应，从而将修饰有蔗糖转化酶的DNA固定在磁珠上；但是在同时加入组氨酸的情况下，组氨酸能抑制点击化学反应的发生。因此通过分离磁珠与溶液，并将清洗后的磁珠溶于蔗糖溶液中进行酶解反应，再使用血糖仪测量酶解后的反应溶液，即可由血糖仪读数的差值来间接检测组氨酸的浓度。该传感器成功地应用于牛奶样品中组氨酸浓度的检测，本发明具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性好等优点。

主权项

一种基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）制备浓度为2.0 uM的修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物；（2）将商品化的修饰有链霉亲和素的磁珠溶于由0.1 M NaCl、0.1 M pH=7.3的磷酸盐缓冲溶液和0.05% 吐温‑20组成的混合溶液中，加入2.0 uM修饰有生物素的DNA，室温振荡30±1分钟，制备修饰在磁珠上的DNA化合物；（3）将修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物与修饰在磁珠上的DNA化合物混合，加入10 nM CuSO4、1 mM抗坏血酸钠和含有组氨酸的待测样品，室温培育1.5±0.5小时；（4）用磁铁分离步骤（3）中的磁珠与混合溶液，用50 uL磷酸盐缓冲溶液洗涤磁珠三次后，加入10 uL磷酸盐缓冲溶液，再加入20 uL 1 M蔗糖溶液，于45℃反应15分钟；（5）用罗氏血糖仪测定步骤（4）反应后的溶液，记录数据；（6）根据组氨酸浓度和血糖仪响应差值，计算得到其线性方程为Y=4.089+1.904lgX，其中Y为血糖仪响应差值，单位为mM；X为其所对应的组氨酸浓度，单位为uM。