[发明专利]一种便携式检测三磷酸腺苷含量的方法

摘要

本发明公开了一种便携式检测三磷酸腺苷含量的方法。将被劈成两段的ATP适配体分别修饰上磁珠和蔗糖转化酶，在ATP存在的条件下，被劈成两段的ATP适配体与目标物ATP发生特异性的识别和结合，从而形成三明治夹心结构，因而将修饰有蔗糖转化酶的适配体固定在磁珠上。通过分离磁珠与溶液，并将清洗后的磁珠溶于蔗糖溶液中进行酶解反应，再使用血糖仪测量酶解后的反应溶液，即可间接检测ATP的浓度。该方法成功地应用于人体血清样品中ATP浓度的检测，本发明具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性好等优点。

主权项

一种便携式检测三磷酸腺苷含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）制备浓度为20 uM的修饰有蔗糖转化酶的DNA化合物；（2）将修饰有链霉亲和素的磁珠溶于由0.1 M NaCl、0.01 M pH=7.3的磷酸盐缓冲溶液和0.05% 吐温‑20组成的混合溶液中，加入100 uM修饰有生物素的DNA，室温振荡30±1分钟，制备修饰在磁珠上的DNA化合物；（3）将修饰有蔗糖转化酶的DNA化合物与修饰在磁珠上的DNA化合物混合，加入含有ATP的待测样品，室温培育1.5±0.05小时；（4）用磁铁分离步骤（3）中的磁珠与混合溶液，用磷酸盐缓冲溶液洗涤磁珠三次后，加入10 uL磷酸盐缓冲溶液，再加入20 uL 1 M蔗糖溶液，于45℃反应20分钟；（5）用血糖仪测定步骤（4）反应后的溶液，记录数据；（6）根据ATP浓度和血糖仪读数的线性方程ΔIG=4.953+3.740lgC，其中ΔIG为反应前后血糖仪响应变化值，单位为mM；C为其所对应的ATP浓度，单位为fM。