[发明专利]一种酶联免疫检测及制备方法

摘要

本发明涉及一种酶联免疫检测及制备方法，是一种新的抗人FN1蛋白的单抗包被酶标板及ELISA检测试剂盒的制备方法。其关键之处主要在于用基因工程方法制备特异性的鼠抗人FN1蛋白单抗，并将此抗体纯化后包被于酶标板上，作为试剂盒的一部分。试剂盒还包括FN1重组蛋白标准品、抗FN1蛋白的多抗、辣根过氧化物酶标记的二抗、样本稀释液、洗涤液、抗体稀释液、显色液、终止液。试剂盒建立了快捷简便测定人血清、血浆中FN1浓度的测定方法。试剂盒主要供科学研究用或癌症相关疾病的临床研究使用。

主权项

人FN1的单抗包被酶标板的制法，通过下列步骤制备而成：以BC005858 DNA为模板，扩增FN1基因片段，与载体PET28a连接，转化BL21，表达大量30KD FN1蛋白片段；将30KD FN1蛋白免疫小白鼠，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，选择阳性杂交瘤细胞于鼠腹水中培养，纯化蛋白得到抗FN1的单抗；将所得单抗用pH9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释后包被96孔板，100μl/孔，4℃ 16‑24小时，PBST洗涤3次，每次30秒，然后除尽孔内液体；用含8%小牛血清的pH7.4的PBS封闭，每孔200μl，37℃，2小时，PBST洗涤3次，干燥后密封；该板即为抗FN1的单抗包被的酶标板，可用于FN1的特异性检测。