[发明专利]溶菌酶—曲拉通联合破碎醋酸杆菌提取乙醛脱氢酶的方法

摘要

一种溶菌酶—曲拉通联合破碎醋酸杆菌提取乙醛脱氢酶的方法，属于从菌体细胞中提取乙醛脱氢酶的方法。利用溶菌酶和曲拉通联合破碎细胞的方法，先用溶菌酶破坏菌体的细胞壁，再采用曲拉通把乙醛脱氢酶从膜上解离下来，高效破碎细胞、较好地保持乙醛脱氢酶活性；取醋酸杆菌湿菌体，加入含溶菌酶的Tris-HCl缓冲溶液，37℃保温；再加入曲拉通X-100溶液，摇匀，置室温下反应，收集上清液，即得乙醛脱氢酶粗酶液。此法工艺简单，条件温和，不需特殊的仪器设备，不仅可以很好地破碎细胞，分离膜结合酶，而且还可使乙醛脱氢酶保持较高的活性，具有广阔的推广应用前景。

主权项

一种溶菌酶—曲拉通联合破碎醋酸杆菌提取乙醛脱氢酶的方法，其特征是：利用溶菌酶和曲拉通联合破碎细胞的方法，先用溶菌酶破坏菌体的细胞壁，再采用曲拉通把乙醛脱氢酶从膜上解离下来，高效破碎细胞、较好地保持乙醛脱氢酶活性；具体步骤如下：（1）湿菌体的获得：取醋酸杆菌发酵液，3000 r/min离心20min，将收集的湿菌体用蒸馏水洗涤2‑3次，每次洗涤完，于3000r/min离心10min，倾去上清液；（2）溶菌酶破碎菌体，取处理好的湿菌体，每克湿菌体加入10mL含7mg/mL溶菌酶的缓冲溶液，所述的缓冲溶液为pH 8.0 、20mmoI/L的Tris‑HCl；混匀，于37℃水浴锅中保温80min，中间振摇3次；（3）曲拉通破碎菌体：每克湿菌体加入2mL 10%的曲拉通X‑100溶液，混匀，置室温下8min；（4）乙醛脱氢酶粗酶液的获得：将经溶菌酶‑曲拉通联合破碎过的菌体溶液于12000 r/min离心15 min，收集上清液，即为乙醛脱氢酶粗酶液。