[发明专利]一种高效的木豆毛状根培养体系建立方法

摘要

本发明提供一种利用木豆无菌苗叶片进行外植体转化，建立木豆毛状根培养体系方法。本发明采用叶片为外植体,建立毛状根培养体系：叶片在1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L的培养基上预培养两天后进行菌液侵染，菌液浓度OD₆₀₀为0.6-0.8，侵染5-10min后转入1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L培养基上共培养3天，然后转入抑菌培养基1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L+400mg/L羧苄青霉素，约一周左右便可形成毛状根。PCR检测证明外源基因已经转入到木豆毛状根中，转化率为60%。转化后毛状根在无激素培养基上生长速度非常快，一个月能增殖7-8倍。次生代谢产物含量高，芹菜素和染料木素含量分别为0.58mg/g(DW)和1.32mg/g(DW)，显著高于实生苗根中含量。本发明提供的培养简单、再生周期短、可持续获得木豆毛状根方法，可用于规模化培养木豆毛状根来提取有价值次生代谢产物，具有很好的应用前景。

主权项

一种高效的木豆毛状根培养体系建立方法，其特征在于：1）采用木豆无菌苗叶片为外植体进行转化；2)确立了适合木豆遗传转化的预培养时间、菌液浓度、侵染时间及共培养时间；3）外植体抑菌培养抑菌剂选择；4）确立了最佳的预培养、共培养及继代增殖培养基；5）此转化程序具有很高的遗传转化率，毛状根生长速度快，次生代谢产物含量高。