[发明专利]一种利用基因共转化策略获取喜树碱新型药源的方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，是提高喜树碱新型药源植物短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法。从长春花中克隆异胡豆苷合成酶和香叶醇-10-羟化酶基因的编码框序列，构建含上述基因的植物双价高效表达载体，以发根农杆菌介导法遗传转化短小蛇根草获得转CrSTR和CrG10H基因的短小蛇根草毛状根；利用植物激素诱导处理高产喜树碱株系，获得了喜树碱含量为4.703mg/g DW的高产毛状根。MTT检测证明，通过转基因方式获得的喜树碱粗提物具有良好的生物活性，肿瘤细胞杀伤力达35.9%。本发明为获取喜树碱提供了一种新型药源，也为生产具重要临床需求的抗癌药物喜树碱提供了一种新方法。

主权项

一种利用基因共转化策略获取喜树碱新型药源的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将异胡豆苷合成酶基因CrSTR和香叶醇‑10‑羟化酶基因CrG10H插入植物表达载体，构建重组载体；(2)将步骤（1）所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；(3)利用所构建的含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化短小蛇根草，获得毛状根；(4)检测步骤（3）毛状根中的CrSTR和CrG10H基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆；(5)利用植物激素对获得的转基因毛状根进行诱导，使其喜树碱含量进一步提高。