[发明专利]甲型流感病毒疫苗哺乳动物细胞适应株的获得方法和适应位点有效
| 申请号： | 201310098172.2 | 申请日： | 2013-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN104073513B | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 孙兵;徐可;胡伟斌;张宏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海巴斯德研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N7/01;C07K14/11;C12N9/12;C12N15/44;C12N15/54;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及甲型流感病毒疫苗哺乳动物细胞适应株的获得方法和适应位点。本发明人通过将现有的甲型流感疫苗骨架毒株在哺乳动物细胞上进行连续传代，得到了哺乳动物细胞适应毒株，该适应毒株内部病毒基因编码的病毒蛋白上的四个氨基酸位点发生了突变，贡献了适应毒株骨架的适应性。该适应毒株在活体包括鸡胚和小鼠上的致病力没有增强，却大大提高了其对哺乳动物细胞的适应性。 | ||
| 搜索关键词： | 流感病毒 疫苗 哺乳动物 细胞 适应 获得 方法 | ||
【主权项】：
一种制备重组甲型流感病毒株的方法，所述方法包括：(1)提供病毒拯救系统，其包含流感病毒拯救所需的流感病毒拯救质粒，能完成流感病毒拯救；所述的流感病毒拯救质粒中，RNA多聚酶PB1的编码基因是突变型基因，其编码突变型RNA多聚酶PB1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:8中第1‑757位且第621位由Q突变为K或者R；RNA多聚酶PA的编码基因是突变型基因，其编码突变型RNA多聚酶PA，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7中第1‑716位且第237位由E突变为K或者R；核外壳核蛋白NP的编码基因是突变型基因，其编码突变型核外壳核蛋白NP，其氨基酸序列如SEQ ID NO:11中第1‑498位且第377位由S突变为N；和非结构蛋白NS1的编码基因是突变型基因，其编码突变型非结构蛋白NS1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3中第1‑230位且第165位由S突变为Y；(2)将步骤(1)的病毒拯救系统中流感病毒拯救质粒转染病毒包装细胞，培养经转染的病毒包装细胞，获得重组甲型流感病毒株，其是哺乳动物细胞适应性的甲型流感病毒株；所述的病毒包装细胞选自：Vero细胞，MDCK细胞。
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