[发明专利]马尾松和湿地松快速分子检测方法及其特异性引物对

摘要

本发明公开了一种马尾松和湿地松快速分子检测方法及其特异性引物对，该引物对为PJ164L/R，具有序列表中SEQ.ID.No.1和SEQ.ID.No.2的核苷酸序列，该引物在马尾松中特异扩增出303bp的产物，在湿地松中特异扩增出325bp的产物。凭借该序列特异性强的特点，建立了马尾松和湿地松快速分子检测方法，该法仅需进行一次PCR扩增反应，经凝胶电泳即可直接根据产物的片段进行判断，操作简单、准确可靠、灵敏度高，适用于马尾松、湿地松的快速可靠的分子检测和鉴定，对将来湿马杂交松苗木的鉴定具有重要的科研价值。

主权项

一种马尾松和湿地松快速分子检测方法，其特征在于包括以下步骤：<1>DNA提取采用改进的CTAB裂解‑硅珠吸附法提取样品DNA；<2>PCR扩增用步骤<1>的样品DNA进行PCR扩增，PCR反应体系：共10μL，包括模板DNA1.2μL、10×Buffer1μL、2mM‑dNTP0.2μL、25mu‑MgCl21.1μL、r‑Taq0.1μL、F‑primer0.25μL、R‑primer0.25μL、ddH2O5.9μL；PCR反应程序：预变性94℃4min；梯度降温扩增16循环，第一次94℃15s，60℃15s，72℃30s，此后每个循环退火温度均比前一个循环低0.5℃；一般性扩增15循环94℃15s，52℃15s，72℃30s；延伸72℃20min；最终保存4℃；<3>凝胶电泳将步骤<2>的PCR产物在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，然后银染检测。