[发明专利]Leber病之线粒体T3866C检测试剂盒及应用

摘要

本发明提供一种Leber病之线粒体T3866C检测试剂盒，由置于盒体内的DNA提取混合液、扩增T3866C的PCR混合液、针对T3866C设计的外引物和内引物、限制性内切酶BglⅡ、阳性对照和阴性对照构成。本发明从少量的血液标本、带毛囊的毛发、口腔粘膜刮片或唾液等样本中快速提取基因组DNA，既解决了传统上从原发性Leber氏病患者血液中提取DNA的问题，减轻被检者的痛苦，又解决了跨地区传递样本的问题；也提高酶切的特异性，避免出现假阴性，提高检测结果的稳定性。本发明是一种快速、简便、准确、经济的检测试剂盒。可实行原发性Leber氏病相关的mtDNAT3866C突变的大规模筛查和预防性检查。

主权项

一种Leber病之线粒体T3866C检测试剂盒，其特征在于，由置于盒体（8）内的DNA提取混合液（1）、扩增T3866C的PCR混合液（2）、针对T3866C设计的一对外引物（3）、针对T3866C设计的一对内引物（4）、限制性内切酶（5）、阳性对照（6）和阴性对照（7）构成，其中DNA提取混合液（1）由细胞裂解液和溶液Ⅰ组成，扩增T3866C的PCR混合液由脱氧单核苷酸、10×PCR缓冲液、MgCl2、三蒸水和DNA聚合酶组成，针对T3866C设计的一对外引物有外前向引物F: TACTTCACAAAGCGCCTTCC和外反向引物R: AAGGATTATGGATGCGGTTG，针对T3866C设计的一对内引物有内前向引物F: CAACACAAGAACACCTCTGATTACTCCTGCCAT CATGACCCTTGGCCATAATATGATAGA和内反向引物R: GAGAGTGCGTCATATGTTGTTCCT AGGAAGA，限制性内切酶为限制性内切酶BglⅡ，阳性对照（6）是含有线粒体序列第3866位点发生T>C突变的酶切样本，阴性对照（7）是不含有线粒体序列第3866位点发生T>C突变的酶切样本，溶液Ⅰ的成分是蛋白酶K。