[发明专利]无固定点靶物质的适配体筛选方法有效
| 申请号： | 201310063844.6 | 申请日： | 2013-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN103114147A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 周培;吴远根;詹深山;王法泽;刘乐;邢海波;詹学佳 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人： | 王毓理;王锡麟 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种分析化学核酸适配体筛选技术领域的无固定点靶物质的适配体筛选方法，通过构建随机寡核苷酸文库以及用于PCR扩增的上游引物和下游引物和固定寡核苷酸文库引物，并利用链霉亲和素标记的琼脂糖颗粒固定寡核苷酸文库，最终通过SELEX方法筛选得到可用于克隆测序的PCR产物，经测序后得到与无固定点靶物质特异亲和性结合的适配体。将本方法应用于重金属镉离子适配体的筛选，得到13条能与镉离子高特异性、强亲和力作用的适配体。本发明固定效果好、适用性强且成本低，可用于无固定点靶物质的适配体筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 固定 物质 适配体 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种无固定点靶物质的适配体筛选方法，其特征在于，通过构建随机寡核苷酸文库以及用于PCR扩增的上游引物和下游引物和固定寡核苷酸文库引物，并利用链霉亲和素标记的琼脂糖颗粒固定寡核苷酸文库，最终通过SELEX方法筛选得到可用于克隆测序的PCR产物，经测序后得到与无固定点靶物质特异亲和性结合的适配体；所述的随机寡核苷酸文库的序列为：5’‑ACCGACCGTGCTGGACTCT‑N30‑AGTATGAGCGAGCGTTGCG‑3’，其中：两端分别为Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的19bp的固定序列，中间30个碱基为随机序列；所述的上游引物，即P1序列，如Seq ID No.1所示；所述的下游引物，即P2序列，如Seq ID No.3所示；所述的固定寡核苷酸文库引物，即P3序列，为5’‑Biotin‑CGCAACGCTCGCTCATACT‑3’其中：P3序列由Biotin和Seq ID No.3所示的下游引物序列组成。
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