[发明专利]用哺乳动物细胞生产高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子的方法有效
| 申请号： | 201310058613.6 | 申请日： | 2013-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN103173489A | 公开（公告）日： | 2013-06-26 |
| 发明（设计）人： | 曹杰 | 申请（专利权）人： | 潍坊易思特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K14/475;C07K1/36;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 潍坊正信专利事务所 37216 | 代理人： | 王伟霞 |
| 地址： | 261025 山东省潍坊*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 用哺乳动物细胞生产高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子的方法，包括如下步骤：构建哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1-hGDNF；选用HEK293细胞作为工程细胞，利用细胞转染方法将pcDNA3.1-hGDNF导入所述HEK293细胞内，得到稳定表达hGDNF的HEK293细胞；用ELISA方法筛选出高产率稳定表达hGDNF的HEK293克隆细胞株作为生产hGDNF的工程株；在DMEM培养基中培养所述工程株，将上清液不断收集，并更换新的DMEM培养基，收集后的上清液经过离心、过滤、调pH值为8.2，得到含hGDNF上清液；通过离子交换层析法和凝胶过滤层析法对蛋白质进行纯化。利用本发明生产的重组人胶质细胞源性神经营养因子糖基化程度和纯度均高于用原核细胞生产的同类产品。 | ||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞 生产 纯度 糖基化 重组 胶质 神经 营养 因子 方法 | ||
【主权项】：
用哺乳动物细胞生产高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、构建哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1‑hGDNF；S2、选用HEK293细胞作为工程细胞，利用Lipofectamine细胞转染方法将pcDNA3.1‑hGDNF导入所述HEK293细胞内，并用G418进行阳性转染细胞筛选，得到稳定表达hGDNF的HEK293细胞；S3、用ELISA方法筛选出高产率稳定表达hGDNF的HEK293克隆细胞株作为生产hGDNF的工程株；S4、蛋白质的生产，在DMEM培养基中培养所述工程株，将上清液收集，并每隔2－3天更换新的DMEM培养基，收集后的上清液经过离心、过滤、调pH值为8.2，得到含hGDNF上清液；S5、通过离子交换层析法和凝胶过滤层析法对蛋白质进行纯化，从而得到高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子。
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