[发明专利]用于检测蛋白质互作的荧光素酶互补图像检测方法及载体试剂盒

摘要

本发明用于检测蛋白质互作的荧光素酶互补图像检测方法及载体试剂盒，属于蛋白质研究技术，其特征在于，将gateway技术引入到荧光素酶互补图像检测方法中，得到了荧光素酶互补图像检测的gateway表达载体、试剂盒及优化的蛋白质互作检测方法，用于高效快速高通量地检测蛋白质之间的互作。

主权项

用于检测蛋白质互作的荧光素酶互补图像检测的表达载体，N端载体为表达荧光素酶N端2~416位多肽片段Nluc的pNG或pUC‑Nluc‑G，C端载体为表达荧光素酶C端398~550位多肽片段Cluc的pCG或pUC‑Cluc‑G，所述pNG及pUC‑Nluc‑G的构建过程如下：用限制性内切酶KpnI‑SalI消化pUC‑Nluc切除多克隆位点序列，采用T4DNApolymerase同时对3’‑突出末端切割，对5’‑突出末端进行补平；然后利用碱性磷酸酶对其末端进行去磷酸化处理，获得pUC‑Nluc‑KS；pUC‑Nluc‑KS与RFC2.1片段连接得pUC‑Nluc‑G；用限制性酶HindIII‑SacI消化pUC‑Nluc‑G质粒形成pUC‑Nluc‑G‑HS；用限制性酶HindIII‑SacI消化pCAMBIA‑nLUC质粒切除nLUC片段，回收载体片段pCAMBIA‑35S‑HS；连接pUC‑Nluc‑G‑HS片段和载体片段pCAMBIA‑35S‑HS得到pNG；所述pCG的构建过程如下：用限制性内切酶KpnI‑PstI消化pUC‑Cluc切除多克隆位点序列，采用T4DNApolymerase同时对3’突出末端切割，对5’突出末端进行补平；然后利用碱性磷酸酶对其末端进行去磷酸化处理，获得pUC‑Cluc‑KP；pUC‑Cluc‑KP与RFC2.1片段连接得pUC‑Cluc‑G；用限制性酶HindIII‑SacI消化pUC‑Cluc‑G质粒形成pUC‑Cluc‑G‑HS；用限制性酶HindIII‑SacI消化pCAMBIA‑cLUC质粒切除cLUC片段，回收载体片段pCAMBIA‑35S‑HS；连接pUC‑Cluc‑G‑HS片段和载体片段pCAMBIA‑35S‑HS得到pCG.。