[发明专利]人静脉注射免疫球蛋白中活化凝血因子Ⅺ检测方法

摘要

本发明人静脉注射免疫球蛋白中制品中活化凝血因子XI检测方法，①将IVIG样品与一种经特殊预处理的人乏血小板血浆（PPP）混合；②向反应体系中添加含有磷脂剂的凝血酶特异荧光底物；③添加起始因子启动TGT,该起始因子组分包括一种钙离子源、一种磷脂剂；④优化的反应体系获得提供参数的凝血酶生成曲线；⑤受检样品凝血酶含量达到峰值时所需时间TTP与样品中所含FXIa水平呈负有关。将受检样品TTP与FXIa标准品TTP进行比较，可以间接获得受检样品中FXIa的水平。这种活化凝血因子FXIa的检测方法，适用于人静脉注射丙种球蛋白（IVIG）制品中残留的微量FXIa的检测，及用于体外评估相关制品的致栓性风险。

主权项

人静脉注射免疫球蛋白中活化凝血因子Ⅺ检测方法，其特征是按以下步骤进行：（1）枸橼酸钠抗凝血浆中加入玉米胰蛋白酶抑制物，可特异、有效地避免因在采血过程中F凝血因子Ⅺ的预活化，从而得到不含活化凝血因子（FXIa）的血浆，从而分离制备出不含活化凝血因子（FXIa）的PPP；(2）反应体系中加入凝血酶特异性荧光底物，特异的凝血酶荧光底物以及磷脂剂浓度的确定：凝血酶特异性荧光底物选择B‑VA‑AMC,对不同浓度底物进行筛选，其中底物工作浓度为1~7mmol/L；磷脂剂选则脑磷脂，选择工作浓度为1~3.5μmol/L；利用分光光度计连接计算机对凝血过程进行扫描，通过荧光信号强弱，可间接反映凝血酶生成含量变化，最后绘制动力学曲线；（3）不同含量的活化人凝血因子FXIa标准品或人静脉注射丙种球蛋白样本中加入含磷脂剂的凝血酶荧光底物以及钙离子源启动凝血酶生成反应，反应结果通过荧光分光光度计检监测凝血酶生成过程中荧光值的变化，最后使用GraphPad软件处理数据得到凝血酶生成曲线，将受检样品的凝血酶生成含量达到最高时所需时间TTP与FXIa标准品的TTP进行比较，可以间接获得受检样品中FXIa的水平。