[发明专利]一种微囊化屎肠球菌活菌制剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种微囊化屎肠球菌活菌制剂的制备方法及其在养殖中的应用。采用“发酵-包被-发酵”的工艺流程，通过在发酵培养基中加入2g/L氯化钙，并在45℃条件下烘干，不仅可以得到球形度好、大小均匀的微囊化屎肠球菌固态产品，而且其活菌数可以达到11.57lgCFU/g。与游离屎肠球菌固态产品相比，微囊化屎肠球菌活菌制剂具有更强的耐受80℃高温及模拟胃肠液的能力，在常温条件下储存2个月，活菌数基本没有变化。微囊化屎肠球菌活菌制剂的发酵前包被制备工艺简单、产品形态较好、抗逆性强、稳定性高，且具有较高的包埋率，作为饲用高活性微生态制剂应用于生产实际，能够抑制肠道腐败菌、致病菌的繁殖及肠道感染，降低腹泻率，促进营养物质的消化吸收，增强免疫力，提高采食量及饲料转化率，降低料肉比。

主权项

1.一种微囊化屎肠球菌活菌制剂的制备方法包括以下步骤：（1） 发酵培养基的优化：屎肠球菌（Enterococcus faecium）菌种购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号：1.2334，通过Plackett-Burman设计法对影响发酵培养基的10个因素进行评价，筛选出具有显著效应的3个因素：蛋白胨、牛肉膏、柠檬酸二铵。用最陡爬坡路径逼近类菌体量最大产量响应区域，并通过响应面分析法确定主要影响因素的最佳水平组合，优化后的培养基成分如下：将上述成分加入到1000mL蒸馏水中， 调pH 6.2~6.4，121℃，20min，高压灭菌，备用。（2）制备种子菌并扩大培养：将活化的屎肠球菌，用接种环挑取一环接种于3 mL 液体种子MRS培养基中，37℃，250rpm，振荡培养16小时后，将种子液以1 %接种量接种于300mL发酵培养基中，三角瓶置于摇床中，37℃，150rpm，振荡培养8小时后，以1 %接种量接种于30L发酵培养基中，经发酵罐液体发酵10小时左右，下罐。（3）微胶囊包被：将屎肠球菌发酵液进行离心，5 000 r/ min，离心10min，收集菌体沉淀，并按照菌胶质量比为1∶5的比例往菌体沉淀中加入 1. 5 %海澡酸钠（经过105 ℃、15min 灭菌）混合均匀，将混合物加入Microencapsulator Equl微胶囊发生器，滴入浓度为11. 1 g/ L的CaCl₂溶液，固化30min，过滤收集微胶囊。（4）再次发酵：将过滤收集得到的微胶囊接种入发酵培养基中，37℃，再次进行发酵，培养10 h左右，过滤收集微胶囊。（5）干燥： 将过滤收集得到的屎肠球菌微胶囊放入电热鼓风干燥箱干燥内，45℃，干燥5小时，便得到微囊化屎肠球菌固态产品。