[发明专利]可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法

摘要

本发明公开一种耗时短、效率高，灵敏度高，可直接应用于临床的同时检测水产动物中哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法。可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl；所述鳗弧菌引物引物序列为：Rpo-F:5’-AGACCAAGAGATCATGGATT-3’、Rpo-R:5’-AGTTGTTCGTATCTGGGATG-3’、所述哈维氏弧菌引物序列为：Tox-F:5’-GAAGCAGCACTCACCGAT-3’、Tox-R:5’-GGTGAAGACTCATCAGCA-3’。

主权项

一种可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，其特征在于依次按如下步骤进行：a. 制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；b. 将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR 反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1‑20 pmol/μl，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1‑20 pmol/μl；所述鳗弧菌引物引物序列为：Rpo‑F:5’‑ AGACCAAGAGATCATGGATT ‑3’Rpo ‑R: 5’‑ AGTTGTTCGTATCTGGGATG‑3’所述哈维氏弧菌引物序列为：Tox‑F: 5’‑ GAAGCAGCACTCACCGAT ‑3’Tox‑R: 5’‑ GGTGAAGACTCATCAGCA ‑3’所述双重PCR 反应条件为：94℃预变性3min；94℃ 30s，52.0‑61℃ 30s，72℃ 1min，共32个循环；72℃终延伸7min； 所述双重PCR反应体系为25μl：1μlDNA模板，2.5μl不含Mg2+的10×PCR buffer，0.5µl的10mM的dNTP，2µl的25mM的Mg2+，0.15µl的Taq酶（50U），引物各1μl，双蒸水17.85µl。