[发明专利]一种免疫基底的制备方法及抗原或抗体的免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种免疫基底的制备方法及抗原或抗体的免疫检测方法，该免疫基底制备方法利用金或银纳米粒子修饰硅片，再在金或银纳米粒子表面修饰抗体/抗原，用于捕获待测抗原/抗体；该抗原或抗体的免疫检测方法应用上述免疫基底的制备方法制备得到的免疫基底以及金或银纳米粒子免疫探针，通过抗原-抗体的免疫复合反应，形成免疫基底-抗原/抗体-免疫探针三层夹心结构，利用金或银纳米粒子的表面增强拉曼散射效应，检测免疫探针表面拉曼标记物的特征指纹谱实现待测抗原/抗体检测，该方法能够大大提高免疫检测的灵敏度，而且可进行高通量的多抗原或多抗体检测。

主权项

一种免疫基底的制备方法，其特征在于包括以下步骤：①‑1、将单面抛光的硅片浸入有机溶剂中，并对硅片进行超声波清洗20～40分钟，然后用去离子水冲洗超声波清洗后的硅片，再对冲洗干净的硅片进行干燥处理；①‑2、在冰浴条件下，按体积比为1:3的比例，将质量百分比为20%～40%的过氧化氢溶液缓慢加入到质量百分比为80%～98%的浓硫酸溶液中，制备得到氧化剂溶液；①‑3、将经步骤①‑1清洗并干燥过的硅片浸入由步骤①‑2制备得到的氧化剂溶液中，在氧化剂溶液中反应0.5～1小时以去除硅片上的有机物，之后取出硅片，用去离子水冲洗硅片数次，然后对硅片进行干燥处理；①‑4、将经步骤①‑3处理后的硅片浸入质量百分比为5%～20%的氢氟酸溶液中，在氢氟酸溶液中反应0.5～1小时后，立即取出硅片并浸入质量百分比为1%～3%的硝酸银溶液或质量百分比为0.05%～2%的氯金酸溶液中，缓慢搅拌1～3分钟，即得到银纳米粒子或金纳米粒子修饰的硅片，取出硅片进行干燥处理；①‑5、将用于进行抗原检测的抗体溶液或用于进行抗体检测的抗原溶液滴加到经步骤①‑4处理后得到的银纳米粒子或金纳米粒子修饰的硅片的抛光面上，并在温度为2～8℃、湿度为40～80%的条件下静置10～12小时，之后依次用三羟甲基氨基甲烷缓冲液和去离子水冲洗硅片，以去除未吸附到银纳米粒子或金纳米粒子上的抗体或抗原，最后对吸附有抗体或抗原的银纳米粒子或金纳米粒子修饰的硅片进行干燥处理；①‑6、在经步骤①‑5处理后的硅片的抛光面上，滴加与步骤①‑5中滴加的抗体溶液或抗原溶液相同体积的牛血清白蛋白溶液，在室温下反应2～4小时，之后依次用含有0.05% Tween 20的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液和去离子水对硅片进行冲洗，以去除未吸附到银纳米粒子或金纳米粒子上的牛血清白蛋白，再对硅片进行干燥处理，制备得到具有特异性选择功能的免疫基底。