[发明专利]香花槐高效组织培养和工厂化繁育的方法

摘要

香花槐高效组织培养和工厂化繁育的方法，取香花槐当年生枝条，消毒后取茎尖接种到诱导培养基，培养得香花槐愈伤组织块；将愈伤组织块切成小块接种到愈伤组织培养基，培养得香花槐愈伤组织分化苗；将分化苗接种到继代培养基，培养得香花槐继代培养苗；将继代培养苗接种到生根培养基，培养得香花槐生根苗；将装有生根苗的培养瓶移到大棚中，先不开瓶驯化，再打开瓶盖驯化；把草炭土、蛭石、和细砂按一定比例混合，喷洒高锰酸钾和塑料膜覆盖消毒后，作为栽植基质装入营养钵；将驯化好的生根苗栽入营养钵，在大棚中驯化一段时间即可向大田移栽。采用本发明方法组培苗的增值达到了15.2倍，移栽到大田营养钵苗的成活率达到了95%以上，降低生产成本6.7%。

主权项

一种香花槐高效组织培养和工厂化繁育的方法，包括以下步骤：（1）诱导培养1）按MS + 6‑BA 0.6‑0.8 mg/L + KT 0.02‑0.05 mg/L + IAA 0.05‑0.1 mg/L培养基配方配制成诱导培养基母液；2）取MS培养基配方质量0.65%‑0.75%的琼脂、0.09%‑0.10%的椰子汁与培养基母液混合均匀，将培养基调配为PH6，在培养瓶中装入20±3 ml培养基，制成固体诱导培养基；3）取香花槐当年生枝条，消毒后取0.5 mm 大小的茎尖部分，接种到诱导培养基上，每培养瓶接种1个茎尖；4）将接种好的培养瓶放到光照强度1500Lx、23‑28℃的条件下，每天光照14h，培养28天，得香花槐愈伤组织块，备用；（2）愈伤组织培养  1） 按MS + 6‑BA 0.3‑0.5 mg/L + KT 0.05‑0.08 mg/L + IAA 0.1‑0.15 mg/L + NAA 0.08‑0.1 mg/L + 硼酸6.8‑7.0mg/L培养基配方配制成愈伤组织培养基母液； 2）取MS培养基配方质量0.65%‑0.75%的琼脂、0.09%‑0.10%的椰子汁与培养基母液混合均匀，将培养基调配为PH6，在培养瓶中装入20±3 ml培养基，制成固体愈伤组织培养基；3）将诱导培养得到的香花槐愈伤组织块在无菌环境下切成0.4‑0.6 cm 的小块，接种到愈伤组织培养基上，每培养瓶接种6‑8 块；4）将接种好的培养瓶放到光照强度2500Lx、23‑28℃的条件下，每天光照14h，培养25天，得香花槐愈伤组织分化苗，备用；（3）继代培养1） 按MS + 6‑BA 0.2‑0.3 mg/L + KT 0.05‑0.08 mg/L + IAA 0.05 mg/L + GA3 1‑1.2 mg/L + 硼酸6.8‑7.0mg/L + 蔗糖5 g/L培养基配方配制成继代培养基母液； 2）取MS培养基配方质量0.65%‑0.75%的琼脂、0.09%‑0.10%的椰子汁与培养基母液混合均匀，将培养基调为PH6，在培养瓶中装入20±3 ml培养基，制成固体继代培养基；3）将愈伤组织培养得到的愈伤组织分化苗在无菌环境下按一芽一节切段，接种到继代培养基上，每培养瓶接种8‑10节段；4）将接种好的培养瓶放到光照强度2500‑3500Lx、23‑28℃的条件下，每天光照14h，培养25天，得香花槐继代培养苗，备用；（4）生根培养1） 按MS + IBA 1.0‑1.2 mg/L +NAA 0.01‑0.02 mg/L + GA3 10.2‑10.3 mg/L + 多效唑2.0‑2.2 mg/L培养基配方配制成生根培养基母液； 2）取MS培养基配方质量0.65%‑0.75%的琼脂、0.09%‑0.10%的椰子汁与培养基母液混合均匀，将培养基调为PH6，在培养瓶中装入20±3 ml培养基，制成固体生根培养基；3）将继代培养得到的培养苗在无菌环境下按两芽一节切段，接种到生根培养基上，每培养瓶接种9‑10节段；4）将接种好的培养瓶放到光照强度2000‑2500Lx、23‑28℃的条件下，每天光照14h，培养15天，得香花槐生根苗，备用；（5）组织培养生根苗驯化 1）将装有组织培养生根苗的培养瓶移到大棚中，不开瓶驯化，驯化条件是：光照强度2000‑4000lx，18‑30℃，驯化72h；2）将培养瓶打开瓶盖驯化，驯化条件是：光照强度2000‑4000lx，18‑30℃，培养瓶内的相对湿度在90%以上，驯化48h；（6）组织培养生根苗移栽1）把草炭土爆晒后过筛，将草炭土、蛭石、和细砂按体积比4：1：1的比例混合，用0.2%的高锰酸钾喷洒拌均，然后用塑料膜覆盖24h以上进行消毒，得到栽植基质，将栽植基质装入营养钵，备用；2）将驯化好的组织培养生根苗从培养瓶中取出，洗掉培养基，栽入装有栽植基质的营养钵，做到根尖朝下、茎直立、浅埋、轻压、抹平；3）将栽好苗的营养钵排放在大棚中，大棚环境条件控制在18‑30℃、相对湿度70%‑90%、光照强度2000‑10000Lx，开始7天内通风时间要短、通风频率要高，7天后逐渐加大通风量，组织培养生根苗在大棚中驯化23‑25天。