[发明专利]一种制备猪瘟活疫苗的方法

摘要

一种制备猪瘟活疫苗的方法，属于生物技术领域。所述方法包括以下步骤：a.细胞接种；b.制苗用细胞培养；c.病毒接种；d.病毒培养与收获；e.疫苗制备。本发明对制苗用细胞进行了筛选，加强了细胞与病毒的适应性；采用激流灌注式生物反应器培养体系提高了病毒的增殖滴度及收获量；而且整个生产工艺不涉及其他生物安全和公共卫生问题，适合于大规模生产。

主权项

一种制备猪瘟活疫苗的方法，其特征在于：它利用激流灌注式生物反应器作为培养工具，所述激流灌注式生物反应器包括第一蠕动泵（1）、第二蠕动泵（2）、第三蠕动泵（3）、第一硅胶管（4）、第二硅胶管（5）、第三硅胶管（6）、有孔硅胶管（7）、纸片载体（8）、灌注袋（9）、混匀器（10）与激流罐（11）；其中，混匀器（10）是具有加热或保温功能、并能对内部液体进行混匀的罐状装置；所述反应器中液体的流向为：灌注袋（9）——硅胶管（4）——混匀器（10）——硅胶管（5）——激流罐（11）——硅胶管（6）——灌注袋（9）；活疫苗制备按以下步骤进行：a.细胞接种将细胞悬液即猪睾丸细胞ST和细胞生长液混合液接种至激流灌注式生物反应器的灌注袋（9），使细胞贴附在聚酯纤维纸片载体（8）上，细胞接种密度为：每克载体接种0.8～1.5×107个细胞；b.制苗用细胞培养设定设备参数：温度T1：36.5～37.5℃、T2：40～42℃、T3：34～36℃，pH：7.2～7.4，DO：50%～70%，振荡速度15～30r/min，空气流量100ml/min～1000ml/min，启动细胞培养程序，进行细胞培养，得到制苗用细胞；c.病毒接种当细胞单日耗糖趋于平稳时，表明细胞达到接毒要求，排空反应器内液体，将猪瘟病毒接种制苗用细胞，接种剂量为有效培养体积的0.3%～1%（V/V），吸附15～30min；加入细胞维持液；d.病毒培养与收获设定设备参数：温度T1：36～37℃、T2：39～41℃、T3：33～35℃，pH：7.3～7.5，DO：50%～70%，振荡速度15～30r/min，空气流量400ml/min～4000ml/min，启动病毒培养程序，扩增培养猪瘟病毒；e.病毒液收获接毒后每72h收获一次，多批次收获病毒液，保存备用；f.疫苗制备向病毒液加入冻干保护剂，分装、冻干，制得猪瘟活疫苗。