[发明专利]用于检测甲型肝炎病毒抗体的方法、检测用的试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及生物学技术领域，具体涉及一种用于检测甲型肝炎病毒抗体的方法、采用此方法进行检测的试剂盒、以及该试剂盒的制备方法，将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的甲肝抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记甲肝抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果。本发明可以消除样本中类风湿因子对结果的假阳性干扰，并使酶标甲肝抗原的过程更加快速高效，同时降低试剂盒的抗体成本。

主权项

一种用于检测甲型肝炎病毒抗体的方法，其特征在于：将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的甲肝抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记甲肝抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果；所述酶标记甲肝抗原溶液采用辣根过氧化物酶标记甲肝抗原溶液，并采用以下步骤制备：（1）将1g辣根过氧化物酶溶于25ml～30ml的0.01M磷酸盐缓冲液中，加入70～85mg乙二胺，用0.1M盐酸将pH值调节至5.0，所得溶液再与115～125mg1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合，室温振荡反应后，采用0.01M磷酸盐缓冲液对所得溶液进行透析，制得氨基化辣根过氧化物酶溶液；（2）将步骤（1）制得的溶液配制成1ml、浓度为5～5.2mg/ml的氨基化辣根过氧化物酶溶液，再向所得溶液内加入60～85μl交联剂，混匀后于室温下反应25～35min；（3）将所述反应物加入截留分子量为10K的超滤管，并对反应物进行离心处理8～12min，再以0.01M的磷酸盐缓冲液复溶滞留结合物至1ml，再以同样离心力离心8～12min，以除去过量的交联剂，并再次复溶滞留物至1ml；（4）加入800～1000μl浓度为1mg/ml的甲肝抗原溶液，并于室温下反应25～35min；（5）使步骤（4）制得的溶液通过SephadexG‑200层析柱，收集第一峰的产物，即为酶标甲肝抗原溶液。