[发明专利]一种培养雨生红球藻生产虾青素的转化方法

摘要

一种培养雨生红球藻生产虾青素的转化方法，包括固定化转化细胞的制备、固定化转化细胞与营养生长细胞相结合、相关的环境条件控制等，步骤如下：①制备高密度的雨生红球藻转化细胞；②制备固定化凝胶载体；③制备固定化雨生红球藻转化细胞凝胶载体，④根据需要的藻种浓度，加入步骤③制备的雨生红球藻转化细胞凝胶载体，固定化凝胶载体与需要转化的培养细胞；⑤采用光照，温度控制在24℃—26℃，控制光照在8000Lux，通过调节水位的方法，控制水位在0.5m，采用流水的方法，实现固定化转化细胞的诱导转化；本发明提供的方法具有诱导效果明显，运行稳定可靠。

主权项

一种雨生红球藻的转化方法，其特征是利用固定化雨生红球藻转化细胞的诱导培养雨生红球藻转化、生产虾青素，步骤如下：①制备高密度的雨生红球藻转化细胞：培养后的雨生红球藻转化细胞的藻液先离心浓缩，离心浓缩条件为1500——3000 r/ min, 3‑5 min；浓缩液经无菌的蒸馏水洗涤后，再一次在离心浓缩条件为1500—3000 r/ min, 3‑5 min离心浓缩，并添加2%氯化钙溶液，配制得藻密度每平方厘米为500万—1000万的高密度藻液；②制备固定化凝胶载体：采用体积浓度5%褐藻酸钠溶液，并按褐藻酸钠溶液的重量添加0.5%硫酸亚铁、0.01%‑0.03%寡糖和适量的海藻酸钠凝胶溶液，混匀得到混合液，煮沸3 min；③制备固定化雨生红球藻转化细胞凝胶载体，步骤②获得的混合液冷却成胶体后，在室温下用滴管向胶体内加入3‑5滴步骤①获得的高密度的雨生红球藻转化细胞，在钙离子的作用下，形成褐藻酸钙固定化凝胶，产生直径为0.1‑1厘米的固化小球。固化小球内部为雨生红球藻转化细胞，通过加固强化可减少雨生红球藻转化细胞的泄漏量；④根据需要的藻种浓度，加入步骤③制备的雨生红球藻转化细胞凝胶载体，固定化凝胶载体与需要转化的培养细胞，其分布的密度达到每平方厘米0.2‑2.0个时共培养；⑤采用光照，温度控制在24℃—26℃，控制光照在8000Lux，通过调节水位的方法，控制水位在0.5m，采用流水的方法，实现固定化转化细胞的诱导转化；培育后，雨生红球藻细胞体积产量高达0.1‑0.7g/L，天然虾青素含量高达细胞干重的0.8‑2.2％。