[发明专利]一种黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法

摘要

本发明提供了一种黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，包括：（1）黄姑鱼或条石鲷精子的遗传灭活；（2）黄姑鱼未受精卵与灭活精子的授精；（3）雌核发育鱼卵染色体加倍起始时间的确定；（4）染色体加倍冷休克温度和持续时间的筛选。本发明首次建立了采用黄姑鱼精子和条石鲷精子诱导黄姑鱼卵子进行雌核发育并获得雌核发育二倍体鱼苗的方法，筛选到适合黄姑鱼卵雌核发育的冷休克起始时间、冷休克温度和持续时间。本发明具有操作方便，高效、实用、可靠的特点；通过本发明诱导获得的黄姑鱼后代只含有雌性亲本的遗传物质，可加速优良基因纯化、使优良的遗传性状得以迅速固定，在黄姑鱼育种和性别控制研究方面具有重要的应用价值和推广应用前景。

主权项

一种黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)黄姑鱼或条石鲷精子的遗传灭活黄姑鱼精子的遗传物质灭活：将黄姑鱼精液用精子稀释液稀释25～75倍，置于18～72mJ/mm2紫外线强度照射； 条石鲷精子的遗传物质灭活：将条石鲷精液用精子稀释液稀释20～50倍，置于12～54mJ/mm2紫外线强度照射； (2)未受精卵与灭活精子的授精将经紫外照射的灭活精液5～30mL与成熟的黄姑鱼卵子20～200mL混合，轻轻摇动混匀，加入5～10mL海水后继续混匀，再加入20～200mL海水置于22～23℃室温下放置1～4min，用于染色体加倍处理；(3)雌核发育鱼卵染色体加倍在授精后1～4min，将卵浸入0～4.5℃的海水浴中进行处理5～20min，取出处理后的卵在12～15℃海水过渡10～15min，然后放入22～23℃海水中准备进行孵化； (4)染色体加倍冷休克诱导处理在休克温度0～4.5℃、冷休克时间5～20min条件下诱导雌核发育二倍体。