[发明专利]一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法无效
| 申请号： | 201210461112.8 | 申请日： | 2012-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN102899421A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 殷佩浩;李琦;邱艳艳;周利红;刘宣;王炎;秦建民;侯黎莉;梁波;胡送娇;包益洁;陈星竹;靳宝辉;宋大迁;叶乃菁;王一斐 | 申请（专利权）人： | 上海中医药大学附属普陀医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/66 |
| 代理公司： | 上海信好专利代理事务所(普通合伙) 31249 | 代理人： | 张静洁;贾慧琴 |
| 地址： | 200062 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其中，该方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤3包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15-20μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。本发明提供的方法，可用来筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 荧光 报告 基因 筛选 血管 生成 相关 microrna 方法 | ||
【主权项】：
一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其特征在于，所述的方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤三包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15‑20 μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。
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