[发明专利]转基因植物材料消化率的体外测定方法

摘要

本发明提供了一种转基因植物材料消化率的体外测定方法。该方法通过转基因植物材料的处理、转基因材料检测试剂的制备、转基因生物材料的检测和转基因生物材料的电泳测定技术处理后，解决了该技术领域中转基因植物材料体外消化率测定精确度和稳定性较低的技术问题；该方法具有操作简易方便，节能环保，安全高效等优点，为转基因生物的安全性评价奠定了重要基础；同时，该方法可实现提高其测定结果的高稳定性；可有效实现改善转基因植物材料体外消化率无法准确测定的难题，为开发我国传统的转基因植物材料资源潜力具有重要意义。

主权项

一种转基因植物材料消化率的体外测定方法，其特征在于，该测定方法依次包括以下步骤：转基因植物材料的处理、转基因材料检测试剂的制备、转基因生物材料的检测和转基因生物材料的电泳测定；所述转基因植物材料的处理依次包括转基因植物材料的提取和转基因植物材料的纯化；其中：所述转基因植物材料的提取：选取洁净的转基因植物材料放入微型植物粉碎机中，其中，所述洁净的转基因植物材料包括籽粒、茎叶、果实和根部；再将所述微型植物粉碎机的转速控制在7000‑9000转/分钟，粉碎时间保持20～25分钟；将粉碎后的植物原料过60目筛，然后经过圆盘式研磨机进行低速精研磨得到研磨样品液，所述圆盘式研磨机的转速控制在85～115转/分钟，研磨时间保持30～45分钟；将上述研磨样品液精确称取50g加入175ml转基因植物提取液，所述转基因植物提取液是体积比为50∶25∶25∶15＝正己烷∶丙酮∶乙醇∶乙二胺四乙酸的混合液；其中，提取后的研磨样品液的残留物用2ml所述转基因植物提取液多次抽提，直到浸出液无色为止，合并浸出液，再将合并后的浸出液放入4℃恒温冰箱中放置25～28分钟，然后将其放入台式密封冷冻离心机，离心处理12分钟，所述台式密封冷冻离心机内置有多个离心管，合并后的浸出液置于上述多个离心管中，所述台式密封冷冻离心机的温度控制在1～3℃；所述转基因植物材料的纯化：将上述所述转基因植物材料的提取的离心处理后的液体静置3～5分钟，取上面的上清液转移到玻璃试管中待用；用体积比为2∶1∶1∶2＝巯基乙醇∶Na2CO3∶HCl∶甲醇的混合液溶解下面的沉积物得沉淀物溶解液，其中，上述沉淀物溶解液的pH值为9.5；然后再将所述沉淀物溶解液放入上述台式密封冷冻离心机，离心处理3分钟，再将上述上清液与所述沉淀物溶解液按照体积比为5∶4进行充分震荡混合；所述转基因生物材料的电泳测定：将上述转基因植物材料的纯化中的充分震荡混合的混合液加入裂解缓冲液混合后，用超声波超声三次，每次3分钟；再加入预热至45～48℃的CTAB提取液中充分混合，然后再将其在低温下充分混合后放入上述台式密封冷冻离心机并控制其转速为15000转/分钟，进行离心6分钟；其中，所述充分震荡混合的混合液、裂解缓冲液和CTAB提取液的体积比为3∶2∶1；然后取离心后的上清液为蛋白提取样品；再对该蛋白提取样品通过电泳设备和含电泳指示剂的缓冲液，进行第一向固定p H梯度等电聚焦电泳，然后进行分离和纯化处理得到处理液；所述转基因生物材料的检测：将上述转基因生物材料的电泳测定中经分离和纯化处理得到的处理液加入检测试剂溶液震荡，进行充分震荡混合完全溶解得混合样品检测液；其中，将检测试剂条浸入合样品检测液中，使检测试剂条的基准线露在液面以上，静止放置15～20分钟，通过酶标仪和分光光度仪进行比色检测上述检测试剂条的出线目的条带的数目，进行 判断消化率的高低。