[发明专利]一种观察早期胚胎体内发育时空分布的组织切片的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种观察早期胚胎体内发育时空分布的组织切片的制备方法及应用。所述制备方法是通过对含各时期鼠胚的输卵管或子宫组织依次进行4%多聚甲醛固定、上行梯度乙醇脱水、浸腊、包埋、连续切片、烘烤、脱腊、下行梯度乙醇复水，最后对切片内组织进行苏木素伊红染色后用中性树胶封片或对切片进行免疫荧光组织化学染色后用抗荧光淬灭封片剂封片。本发明的组织切片可以用于制作小鼠早期胚胎发育图谱，也可用于Crb3在小鼠体内发育各时期胚胎中表达的检测。本发明具有可以保证胚内各个器官位置的相对固定，便于观察胚胎细胞在生殖道内位置变化和胚胎发育的连续性和结构清晰、便于保存的优点。

主权项

一种观察哺乳动物早期胚胎体内发育时空分布的组织切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）分别将含各时期哺乳动物胚的输卵管和子宫组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中进行固定；含各时期哺乳动物胚的输卵管包括含受精卵、2‑细胞胚、4‑细胞胚和8‑细胞胚的输卵管；含各时期哺乳动物胚的子宫组织包括含桑葚胚、早期囊胚和晚期囊胚的子宫组织；2）将固定好的输卵管和子宫组织用水冲洗后，分别经上行梯度乙醇脱水，然后经浸蜡、包埋、连续切片得到切片，再裱片于多聚赖氨酸处理的载玻片上，45～50℃温箱烤片，备染；3）烤好的切片分别以二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ脱蜡；然后进行下行梯度乙醇复水，并用蒸馏水浸泡；4）将复水后的切片用苏木素伊红染色后用中性树胶封片；或对切片进行免疫荧光组织化学染色后用抗荧光淬灭封片剂封片。