[发明专利]一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法

摘要

本发明提供一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法，所述方法包括：（1）精液采集，（2）抗冻液选择，（3）精子的稀释与平衡，（4）精子的冷冻，（5）精子的解冻与复苏。本发明具有操作时间短、诱导效果好、毒性作用少、损伤程度小、成活率高等优点，其在大口黑鲈的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。本发明还提供一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法的用途。

主权项

一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法，其特征在于，所述方法包括：（1）精液采集，（2）抗冻液选择，（3）精子的稀释与平衡，（4）精子的冷冻，（5）精子的解冻与复苏；精液采集：选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的大口黑鲈个体，在大口黑鲈繁殖期按800UI/kg胸鳍注射进行诱导促熟，36h后收集精液于4℃冰箱中预冷的干净研钵中；抗冻液选择：以任氏液为基础，加10%甲醇抗冻保护剂；精子的稀释与平衡：精液与任氏液按1:6稀释后，经4℃平衡30min，加入10%甲醇，混匀，分装； 精子的冷冻：分装好的精液在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存；精子的解冻与复苏：将冻存管在液氮蒸汽中平衡5分钟，迅速置于37℃水浴锅中快速晃动至融化。