[发明专利]应用基于小麦EST序列的黑麦染色体特异分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的方法

摘要

本发明公开了基于小麦EST序列的黑麦5R染色体特异的分子标记，此分子标记为根据小麦染色体上的表达序列标签序列而设计的正向引物和反向引物，用于鉴定黑麦5R染色体的特异标记；应用这些分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的基本步骤包括：A、标记引物的选定和制备；B、标记引物的稀释；C、黑麦染色体的特异标记：C-1、模板DNA的提取，C-2、PCR扩增，C-3、扩增产物的检测，C-4、结果比对。本发明基于小麦染色体上的EST序列设计开发出了一套黑麦染色体的特异分子标记，借助此分子标记能够用普通PCR技术快速、准确的鉴定小麦遗传背景中的5R黑麦染色体，为黑麦染色体上的有益基因转移到栽培小麦背景中提供了简便有效的分子鉴定方法。

主权项

应用基于小麦EST序列的黑麦染色体特异分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括：A、分子标记的选定和制备：合成标记引物“11‑MAG1242”，其正向引物序列见SEQ ID NO：21，其反向引物序列见SEQ ID NO：22；B、标记引物的稀释：将上步合成的标记引物，先用1×TE缓冲液溶解成100mmol L‑1的母液放入‑20℃的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成10mmol L‑1的工作液待用；其中1×TE缓冲液的配方为，10mmol L‑1 Tris‑HCl与1mmol L‑1 EDTA，pH=8.0；C、黑麦染色体的特异标记：C‑1、模板DNA的提取：取待测物——小麦与黑麦的远缘杂交后代材料，对照物0——不包含待测黑麦染色体的样品，对照物1——包含待测黑麦染色体的样品，然后利用常规DNA提取方法分别提取三者的DNA；C‑2、PCR扩增：以C‑1所得DNA样品为模板，利用步骤B所得工作液在PCR扩增仪中分别对待测物、对照物0及对照物1进行扩增；C‑3、扩增产物的检测：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤C‑2所得的扩增产物，用银染法进行染色，并在凝胶成像仪上照相；C‑4、结果比对：将待测远缘杂交后代材料的电泳图谱分别与对照物0、对照物1的电泳图谱进行比对，如果待测远缘杂交后代材料和对照物1的电泳图谱均有特异扩增片段，说明远缘杂交后代材料中有待测黑麦染色体；如果待测远缘杂交后代材料的电泳图谱与对照物0的电泳图谱一致，均不含有特异扩增片段，说明远缘杂交后代材料中不含有待测黑麦染色体。