[发明专利]一种细胞灭活疫苗、卵黄抗体及卵黄抗体的注射液和冻干粉

摘要

本发明公开了一种细胞灭活疫苗，该疫苗同时包含猪圆环病毒抗原表位和鹅圆环病毒抗原表位，由以下方法制得：从猪圆环病毒中选筛出高致病性毒株，并从毒株中挑选出多个具有抗原免疫活性的病毒表位，并将这些抗原表位点连接后插入到鹅圆环病毒基因组中增殖，甲醛灭活加弗式佐剂即得细胞灭活疫苗。本发明同时公开了该细胞灭活疫苗制得的卵黄抗体、卵黄抗体注射液和冻干粉，本产品将猪的圆环病毒基因插入到鹅圆环病毒基因组中，增强对鹅圆环病毒的免疫原性和对鹅机体的免疫系统的刺激，使其产生抗体要比单一使用猪圆环病毒疫苗产生的卵黄抗体效价高，临床应用效果好，同时产生鹅的圆环抗体对猪圆环疾病具有辅助治疗效果。

主权项

一种细胞灭活疫苗，其特征在于，由以下方法制备获得：1）取病料制成匀浆，反复冻融后离心，10000‑12000rpm离心15‑20min，取上清液，过滤，接种敏感单层PK‑15细胞；2）将PK‑15细胞连续传代，细胞冻融，提取PCV2病毒的DNA，针对PCV2病毒ORF1基因，由具有序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的核苷酸序列以及SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的核苷酸序列组成的两对特异性PCR引物对目的基因扩增；3）扩增产物克隆入PMD‑18T载体进行测序，鉴定；4）筛选多个具有抗原免疫活性的病毒表位，经过特异引物PCR、产物电泳、测序、克隆、纯化、检测每个表位的蛋白免疫活性，选择5个抗原表位点；5）将5个抗原表位点连接，插入到鹅圆环病毒标准毒株基因中，然后病毒在敏感性细胞PK‑15单层上传代，获得免疫原性的毒株；6）扩大增殖，用IPMA法测定病毒效价；7）当病毒在PK‑15细胞中传代表现稳定细胞病变出现规律，种毒的毒价稳定在103.9TCID50/1.0ml，收集细胞，甲醛灭活加弗式佐剂制得细胞灭活疫苗。