[发明专利]羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法无效
| 申请号： | 201210360270.4 | 申请日： | 2012-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN103087189A | 公开（公告）日： | 2013-05-08 |
| 发明（设计）人： | 陈志;罗卫星;刘若余;石照应;陈颖;杨海兵;李世功;龙国荣;宋桃伟;杨永强;蔡惠芬;张依裕;李维静 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C07K16/22 | 分类号： | C07K16/22;C07K16/06 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法，利用设计的特异性引物GFI-1将羊独立生长因子1B基因进行PCR扩增，获得它的CDS序列；并通过特异性引物GFI-2来酶切，并构建原核表达载体，获得原核表达载体pET32a-GFI1B；再将原核表达载体pET32a-GFI1B进行目的基因的诱导表达，获得羊独立生长因子1B蛋白；将羊独立生长因子1B蛋白纯化至85%以上；将纯化后的羊独立生长因子1B蛋白免疫到动物上，在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清；将血清纯化后，获得目的羊独立生长因子1B基因的多克隆抗体。 | ||
| 搜索关键词： | 独立 生长因子 克隆 抗体 获取 方法 | ||
【主权项】：
一种羊独立生长因子1B的多克隆抗体的获取方法，其特征在于：利用设计的特异性引物GFI‑1将羊独立生长因子1B基因进行PCR扩增，获得它的CDS序列；并通过特异性引物GFI‑2来酶切，并构建原核表达载体，获得原核表达载体pET32a‑ GFI1B；再将原核表达载体pET32a‑ GFI1B进行目的基因的诱导表达，获得羊独立生长因子1B蛋白；将羊独立生长因子1B蛋白纯化至85%以上；将纯化后的羊独立生长因子1B蛋白免疫到动物上，在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清；将血清纯化后，获得目的羊独立生长因子1B的多克隆抗体；特异性引物GFI‑1包括上游引物：5 '‑ATGCCACGCTCCTTCCTGGT‑3及下游引物：5'‑ TCACTTGAGGTTGTGCTGGCT‑ 3’；特异性引物GFI‑2包括上游引物：5'‑GGATCCATGCCACGCTCCTTCCT‑3'；下游引物：5'‑GAATTCTCACTTGAGGTTGTGCTGGC‑3' 。
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