[发明专利]用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法

摘要

一种用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法，该方法先将病原鳗利斯顿氏菌BH1菌株灭活、离心得灭活菌体；然后制得黄芪浸出液；再由白油、硬脂酸铝、司班80制得油相，灭活菌体与黄芪浸出液混合制得疫苗水相；最后将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的副溶血弧菌油乳剂灭活疫苗。该疫苗可以得到抗鳗利斯顿氏菌的高免卵黄抗体，高免卵黄抗体的使用能增强半滑舌鳎等海水鱼类对病原鳗利斯顿氏菌的免疫力，提高其成活率，增加其产量，提高半滑舌鳎等海水鱼类养殖生产的经济效益。从根本上解决了目前半滑舌鳎等海水鱼类养殖生产过程中易发生鳗利斯顿氏菌所致疾病的问题。

主权项

一种用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法，其特征在于：该方法以病原鳗利斯顿氏菌BH1（Listonella anguillarum BH1）经甲醛溶液灭活后作为免疫原，以白油、司班80和硬脂酸铝作油乳剂，以黄芪浸出液作为免疫增强剂，乳化制备成油乳剂灭活疫苗；其具体步骤如下：（1）将病原鳗利斯顿氏菌BH1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28‑30℃摇床培养24h，加入体积终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，离心得灭活菌体；（2）取黄芪用蒸馏水浸泡30‑60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药1g/mL，得黄芪浸出液；（3）将白油加热至50‑55℃，加入硬脂酸铝，硬脂酸铝与白油的重量体积比为1‑3：100 g / ml，继续加热至65‑70℃，加入司班80，司班80与白油的体积比为5‑7：100，直至终温度115‑120℃，维持15‑20 min，制得油相，冷却备用；（4）将灭活菌体与黄芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原鳗利斯顿氏菌BH1免疫原为1011cells/mL，黄芪浸出液为1g/mL，水相中还加入了终体积浓度为4%的吐温80；（5）将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的鳗利斯顿氏菌油乳剂灭活疫苗。