[发明专利]用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法

权利要求书

1.一种用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法，其特征在于：该方法以病原鳗利斯顿氏菌BH1（Listonella anguillarum BH1）经甲醛溶液灭活后作为免疫原，以白油、司班80和硬脂酸铝作油乳剂，以黄芪浸出液作为免疫增强剂，乳化制备成油乳剂灭活疫苗；其具体步骤如下：

（1）将病原鳗利斯顿氏菌BH1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28-30℃摇床培养24h，加入体积终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，离心得灭活菌体；

（2）取黄芪用蒸馏水浸泡30-60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药1g/mL，得黄芪浸出液；

（3）将白油加热至50-55℃，加入硬脂酸铝，硬脂酸铝与白油的重量体积比为1-3：100 g / ml，继续加热至65-70℃，加入司班80，司班80与白油的体积比为5-7：100，直至终温度115-120℃，维持15-20 min，制得油相，冷却备用；

（4）将灭活菌体与黄芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原鳗利斯顿氏菌BH1免疫原为10¹¹cells/mL，黄芪浸出液为1g/mL，水相中还加入了终体积浓度为4%的吐温80；

（5）将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的鳗利斯顿氏菌油乳剂灭活疫苗。